发明创造名称：嵌合因子VIII多肽及其用途
外观设计名称：
决定号：188936
决定日：2019-09-03
委内编号：1F246310
优先权日：
申请（专利）号：201380013452.7
申请日：2013-01-12
复审请求人：比奥贝拉蒂治疗公司
无效请求人：
授权公告日：
审定公告日：
专利权人：
主审员：李岚
合议组组长：张弛
参审员：王翔宇
国际分类号：A61K38/37
外观设计分类号：
法律依据：专利法第22条第3款
决定要点：当要求保护的技术方案相对于最接近的现有技术存在区别特征时，如果现有技术中给出了将上述区别特征应用到该最接近的现有技术以解决其存在的技术问题的启示，这种启示使得本领域技术人员在面对所述技术问题时，有动机改进该最接近的现有技术并获得要求保护的发明，则所述技术方案是显而易见的。
全文：
本复审请求涉及申请号为201380013452.7，名称为“嵌合因子VIII多肽及其用途”的发明专利申请。申请人于2015年06月16日由比奥根艾迪克MA公司变更为比奥根MA公司，继而于2018年02月06日再次变更为比奥贝拉蒂治疗公司。本申请的申请日为2013年01月12日，最早优先权日为2012年01月12日，公开日为2015年01月07日。
经实质审查，国家知识产权局原审查部门于2017年11月24日发出驳回决定，驳回了本发明专利申请，其理由是：权利要求1-129不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。驳回决定所依据的文本为：2014年09月10日本申请进入中国国家阶段是提交的国际申请文件的中文译文的说明书第1-188页（即第1-952段）、说明书附图第1-32页（即图1-图26）、说明书摘要、摘要附图、说明书核苷酸和氨基酸序列表第1-124页；以及2016年10月26日提交的权利要求第1-129项 。驳回决定所针对的权利要求书如下：
“1. 嵌合蛋白，其包括因子VIII(FVIII)蛋白和VWF片段，其中所述VWF片段包括VWF的D'结构域和D3结构域，且其不结合清除受体，且其中所述VWF片段通过共价键连接至所述FVIII部分。
2. 根据权利要求1所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段通过共价键间接连接至所述FVIII部分。
3. 根据权利要求1或2所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段是单体。
4. 根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段包括彼此之间一个或多个连接的两个、三个、四个、五个或六个VWF片段。
5. 根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段包含至少一个异源部分(H1)以及所述VWF片段和所述异源部分(H1)之间的任选的连接基。
6. 根据权利要求5所述的嵌合蛋白，其中连接至所述VWF片段的所述至少一个异源部分(H1)包括多肽、非多肽部分或它们二者。
7. 根据权利要求5或权利要求6所述的嵌合蛋白，其中所述异源部分(H1)包括延长所述FVIII蛋白的所述半衰期的部分。
8. 根据权利要求7所述的嵌合蛋白，其中所述异源部分(H1)包括免疫球蛋白恒定区、白蛋白、白蛋白结合部分、PAS序列、HAP序列、转铁蛋白或它们的任何组合。
9. 根据权利要求6所述的嵌合蛋白，其中所述非多肽部分包括聚乙二醇(PEG)、聚唾液酸、羟乙基淀粉(HES)或它们的任何组合。
10. 根据权利要求8所述的嵌合蛋白，其中所述异源部分(H1)包括第一Fc区。
11. 根据权利要求7所述的嵌合蛋白，其中所述异源部分(H1)包括包含至少50个氨基酸的氨基酸序列。
12. 根据权利要求5至11中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述嵌合蛋白包含所述VWF片段和所述异源部分(H1)之间的可切割的连接基。
13. 根据权利要求12所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含一个或多个可切割位点。
14. 根据权利要求12或权利要求13所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基能够被选自由以下组成的组的蛋白酶切割：因子XIa、因子XIIa、激肽释放酶、因子VIIa、因子IXa、因子Xa、因子IIa(凝血酶)、弹性蛋白酶-2、粒酶-B、TEV、肠激酶、蛋白酶3C、分选酶A、MMP-12、MMP-13、MMP-17和MMP-20。
15. 根据权利要求12所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含TLDPRSFLLRNPNDKYEPFWEDEEK(SEQ ID NO:56)。
16. 根据权利要求12至14中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含一个或多个切割位点，所述切割位点包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：RRRR(SEQ ID NO:52)、RKRRKR(SEQ ID NO:53)、RRRRS(SEQ ID NO:54)、TQSFNDFTR(SEQ ID NO:47)、SVSQTSKLTR(SEQ ID NO:48)、DFLAEGGGVR(SEQ ID NO:49)、TTKIKPR(SEQ ID NO:50)、LVPRG(SEQ ID NO:55)、ALRPRVVGGA(SEQ ID NO:51)、KLTRAET(SEQ ID NO:29)、DFTRVVG(SEQ ID NO:30)、TMTRIVGG(SEQ ID NO:31)、SPFRSTGG(SEQ ID NO:32)、LQVRIVGG(SEQ ID NO:33)、PLGRIVGG(SEQ ID NO:34)、IEGRTVGG(SEQ ID NO:35)、 LTPRSLLV(SEQ ID NO:36)、LGPVSGVP(SEQ ID NO:37)、VAGDSLEE(SEQ ID NO:38)、GPAGLGGA(SEQ ID NO:39)、GPAGLRGA(SEQ ID NO:40)、APLGLRLR(SEQ ID NO:41)、PALPLVAQ(SEQ ID NO:42)、ENLYFQG(SEQ ID NO:43)、DDDKIVGG(SEQ ID NO:44)、LEVLFQGP(SEQ ID NO:45)和LPKTGSES(SEQ ID NO:46)。
17. 根据权利要求1至16中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含FVIII和至少一个第二异源部分(H2)。
18. 根据权利要求17所述的嵌合蛋白，其中所述第二异源部分(H2)能够延长所述FVIII蛋白的所述半衰期。
19. 根据权利要求17或权利要求18所述的嵌合蛋白，其中所述第二异源部分(H2)包括多肽、非多肽部分或它们二者。
20. 根据权利要求17或权利要求18所述的嵌合蛋白，其中所述第二异源部分(H2)包括免疫球蛋白恒定区、白蛋白、白蛋白结合部分、PAS序列、HAP序列、转铁蛋白或它们的任何组合。
21. 根据权利要求17或权利要求18所述的嵌合蛋白，其中所述第二异源部分(H2)包括聚乙二醇(PEG)、聚唾液酸、羟乙基淀粉(HES)或它们的任何组合。
22. 根据权利要求17所述的嵌合蛋白，其中所述第二异源部分(H2)包括第二Fc区。
23. 根据权利要求1至22中任一项所述的嵌合蛋白，所述嵌合蛋白包含第一多肽链和第二多肽链，所述第一多肽链包含VWF片段、异源部分(H1)和连接基，所述第二多肽链包含所述FVIII蛋白和第二异源部分(H2)，其中所述第一多肽链和所述第二多肽链通过共价键彼此连接。
24. 根据权利要求23所述的嵌合蛋白，其中所述异源部分(H1)和所述第二异源部分(H2)通过所述共价键彼此连接，其中所述共价键防止体内所述第一多肽链中的所述VWF片段被内源性VWF替换。
25. 根据权利要求24所述的嵌合蛋白，其中所述共价键是二硫键。
26. 根据权利要求17至25中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白通过连接基连接至所述第二异源部分(H2)。
27. 根据权利要求26所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述第二异源部分(H2)之间的所述连接基是可切割的连接基。
28. 根据权利要求17至27所述的嵌合蛋白，其中所述异源部分(H1)和所述第二异源部分(H2)通过连接基连接。
29. 根据权利要求28所述的嵌合蛋白，其中所述连接基是scFc连接基。
30. 根据权利要求29所述的嵌合蛋白，其中所述scFc连接基是可加工的连接基。
31. 根据权利要求1至30中任一项所述的嵌合蛋白包含选自由以下组成的组的式：
(a)V-L1-H1-L3-C-L2-H2，
(b)H2-L2-C-L3-H1-L1-V，
(c)C-L2-H2-L3-V-L1-H1，
(d)H1-L1-V-L3-H2-L2-C，
(e)H1-L1-V-L3-C-L2-H2，
(f)H2-L2-C-L3-V-L1-H1，
(g)V-L1-H1-L3-H2-L2-C，
(h)C-L2-H2-L3-H1-L1-V，
(i)H2-L3-H1-L1-V-L2-C，
(j)C-L2-V-L1-H1-L3-H2，
(k)V-L2-C-L1-H1-L3-H2，和
(l)H2-L3-H1-L1-C-L2-V，
其中V是包含VWF的所述D’结构域和所述D3结构域的所述VWF片段；
L1是任选的连接基；
L2是任选的连接基；
(a)至(f)中的L3是任选的连接基，
(g)至(l)中的L3是任选的scFc连接基，
H1和H2中的每个包括任选的异源部分；
C包括FVIII蛋白；并且
(-)是肽键或一个或多个氨基酸。
32. 根据权利要求1至30中任一项所述的嵌合蛋白，包含选自由以下组成的组的式：
(m)V-L1-H1:H2-L2-C，
(n)V-L1-H1:C-L2-H2，
(o)H1-L1-V:H2-L2-C，
(p)H1-L1-V:C-L2-H2，
(q)V:C-L1-H1:H2，
(r)V:H1-L1-C:H2，
(s)H2:H1-L1-C:V，
(t)C:V-L1-H1:H2，和
(u)C:H1-L1-V:H2，
其中V是包含VWF的所述D’结构域和所述D3结构域的所述VWF片段；
L1是任选的连接基；
L2是任选的连接基；
H1是所述异源部分(H1)；
H2是所述第二异源部分(H2)；
C是FVIII蛋白；
(-)是肽键或一个或多个氨基酸；并且
(:)是所述H1和所述H2之间的共价键。
33. 根据权利要求31或权利要求32所述的嵌合蛋白，其中除所述共价键、所述肽主链或所述一个或多个氨基酸之外，所述VWF片段和所述FVIII蛋白还能通过非共价键彼此缔合。
34. 根据权利要求31或权利要求32所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段抑制或阻止内源性VWF与所述FVIII蛋白的结合。
35. 根据权利要求32至34中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述H1和所述H2之间的所述共价键是二硫键。
36. 根据权利要求31至35中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述H1包括多肽、非多肽部分或它们二者。
37. 根据权利要求36所述的嵌合蛋白，其中所述H1包括免疫球蛋白恒定区、白蛋白、白蛋白结合部分、PAS序列、HAP序列、转铁蛋白或它们的任何组合。
38. 根据权利要求36或权利要求37所述的嵌合蛋白，其中所述H1包括第一Fc区。
39. 根据权利要求36所述的嵌合蛋白，其中所述非多肽部分包括聚乙二醇(PEG)、聚唾液酸、羟乙基淀粉(HES)或它们的任何组合。
40. 根据权利要求31至39中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述H2包括多肽、非多肽部分或它们二者。
41. 根据权利要求40所述的嵌合蛋白，其中所述H2包括免疫球蛋白恒定区、白蛋白、白蛋白结合部分、PAS序列、HAP序列、转铁蛋白或它们的任何组合。
42. 根据权利要求31至41中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述H2包括第二Fc区。
43. 根据权利要求42所述的嵌合蛋白，其中所述非多肽部分包括聚乙二醇(PEG)、聚唾液酸、羟乙基淀粉(HES)或它们的任何组合。
44. 根据权利要求43所述的嵌合蛋白，其中所述共价键是二硫键。
45. 根据权利要求1至44中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含第三异源部分(H3)。
46. 根据权利要求1至45中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含第四异源部分(H4)。
47. 根据权利要求1至46中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含第五异源部分(H5)。
48. 根据权利要求1至47中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含第六异源部分(H6)。
49. 根据权利要求44至48中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述第三异源部分(H3)、所述第四异源部分(H4)、所述第五异源部分(H5)和所述第六异源部分(H6)中的一者或多者能够延长所述FVIII蛋白的所述半衰期。
50. 根据权利要求1至49中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述第三异源部分(H3)、所述第四异源部分(H4)、所述第五异源部分(H5)和所述第六异源部分(H6)连接至所述FVIII蛋白的所述C末端或N末端或插入所述FVIII蛋白的两个氨基酸之间。
51. 根据权利要求1至50中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述第三异源部分(H3)、所述第四异源部分(H4)、所述第五异源部分(H5)和所述第六异源部分(H6)中的一者或多者包括包含至少50个氨基酸的氨基酸序列。
52. 根据权利要求1至51中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII的所述半衰期比野生型FVIII延长至少1.5倍。
53. 根据权利要求1至52中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白的所述半衰期为至少10小时。
54. 根据权利要求5至53中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述第二异源部分(H2)之间的所述连接基或所述VWF片段和所述异源部分(H1)之间的所述连接基还包含位于所述连接基的所述N-末端区的第一切割位点(P1)、位于所述连接基的所述C-末端区的第二切割位点(P2)或它们二者。
55. 根据权利要求5至54中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述第二异源部分(H2)之间的所述连接基、所述VWF片段和所述异源部分(H1)之间的所述连接基或它们二者包含TLDPRSFLLRNPNDKYEPFWEDEEK(SEQ ID NO:56)。
56. 根据权利要求5至54中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述第二异源部分(H2)之间的所述连接基、所述VWF片段和所述异源部分(H1)之间的所述连接基或它们二者被选自由以下组成的组的蛋白酶切割：因子XIa、因子XIIa、激肽释放酶、因子VIIa、因子IXa、因子Xa、因子IIa(凝血酶)、弹性蛋白酶-2、粒酶-B、TEV、肠激酶、蛋白酶3C、分选酶A、MMP-12、MMP-13、MMP-17和MMP-20。
57. 根据权利要求5至56中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述第二异源部分(H2)之间的所述连接基、所述VWF片段和所述异源部分(H1)之间的所述连接基或它们二者包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：RRRR(SEQ ID NO:52)、RKRRKR(SEQ ID NO:53)、RRRRS(SEQ ID NO:54)、TQSFNDFTR(SEQ ID NO:47)、SVSQTSKLTR(SEQ ID NO:48)、DFLAEGGGVR(SEQ ID NO:49)、TTKIKPR(SEQ ID NO:50)、LVPRG(SEQ ID NO:55)、ALRPRVVGGA(SEQ ID NO:51)、KLTRAET(SEQ ID NO:29)、DFTRVVG(SEQ ID NO:30)、TMTRIVGG(SEQ ID NO:31)、SPFRSTGG(SEQ ID NO:32)、LQVRIVGG(SEQ ID NO:33)、PLGRIVGG(SEQ ID NO:34)、IEGRTVGG(SEQ ID NO:35)、LTPRSLLV(SEQ ID NO:36)、LGPVSGVP(SEQ ID NO:37)、 VAGDSLEE(SEQ ID NO:38)、GPAGLGGA(SEQ ID NO:39)、GPAGLRGA(SEQ ID NO:40)、APLGLRLR(SEQ ID NO:41)、PALPLVAQ(SEQ ID NO:42)、ENLYFQG(SEQ ID NO:43)、DDDKIVGG(SEQ ID NO:44)、LEVLFQGP(SEQ ID NO:45)和LPKTGSES(SEQ ID NO:46)。
58. 根据权利要求54至57中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述第一酶切割位点和所述第二酶切割位点是相同的或不同的。
59. 根据权利要求1至58中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述VWF片段之间的所述连接基、所述FVIII蛋白和所述第二异源部分(H2)之间的所述连接基以及所述VWF片段和所述异源部分(H1)之间的所述连接基中的一者或多者具有1至2000个氨基酸的长度。
60. 根据权利要求1至58中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述VWF片段之间的所述连接基、所述FVIII蛋白和所述第二异源部分(H2)之间的所述连接基以及所述VWF片段和所述异源部分(H1)之间的所述连接基中的一者或多者具有至少10个氨基酸的长度。
61. 根据权利要求1至60中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述VWF片段之间的所述连接基、所述FVIII蛋白和所述第二异源部分(H2)之间的所述连接基以及所述VWF片段和所述异源部分(H1)之间的所述连接基中的一者或多者包含gly/ser肽。
62. 根据权利要求61所述的嵌合蛋白，其中所述gly/ser肽具有式(Gly4Ser)n或S(Gly4Ser)n，其中n为选自由以下组成的组的正整数：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80或100。
63. 根据权利要求62所述的嵌合蛋白，其中所述(Gly4Ser)n连接 基是(Gly4Ser)3或(Gly4Ser)4。
64. 根据权利要求1至63中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述VWF片段之间的所述连接基是可切割的连接基。
65. 根据权利要求64所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含一个或多个凝血酶切割位点。
66. 根据权利要求64或权利要求65所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含TLDPRSFLLRNPNDKYEPFWEDEEK(SEQ ID NO:56)。
67. 根据权利要求64至66中任一项所述的嵌合蛋白，其中可切割的连接基被选自由以下组成的组的蛋白酶切割：因子XIa、因子XIIa、激肽释放酶、因子VIIa、因子IXa、因子Xa、因子IIa(凝血酶)、弹性蛋白酶-2、粒酶-B、TEV、肠激酶、蛋白酶3C、分选酶A、MMP-12、MMP-13、MMP-17和MMP-20。
68. 根据权利要求64至66中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：RRRR(SEQ ID NO:52)、RKRRKR(SEQ ID NO:53)、RRRRS(SEQ ID NO:54)、TQSFNDFTR(SEQ ID NO:47)、SVSQTSKLTR(SEQ ID NO:48)、DFLAEGGGVR(SEQ ID NO:49)、TTKIKPR(SEQ ID NO:50)、LVPRG(SEQ ID NO:55)、ALRPRVVGGA(SEQ ID NO:51)、KLTRAET(SEQ ID NO:29)、DFTRVVG(SEQ ID NO:30)、TMTRIVGG(SEQ ID NO:31)、SPFRSTGG(SEQ ID NO:32)、LQVRIVGG(SEQ ID NO:33)、PLGRIVGG(SEQ ID NO:34)、IEGRTVGG(SEQ ID NO:35)、LTPRSLLV(SEQ ID NO:36)、LGPVSGVP(SEQ ID NO:37)、VAGDSLEE(SEQ ID NO:38)、GPAGLGGA(SEQ ID NO:39)、GPAGLRGA(SEQ ID NO:40)、APLGLRLR(SEQ ID NO:41)、PALPLVAQ(SEQ ID NO:42)、ENLYFQG(SEQ ID NO:43)、DDDKIVGG(SEQ ID NO:44)、 LEVLFQGP(SEQ ID NO:45)和LPKTGSES(SEQ ID NO:46)。
69. 根据权利要求1至68中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述VWF片段之间的所述连接基还包含分选酶识别基序。
70. 根据权利要求69所述的嵌合蛋白，其中所述分选酶识别基序包含所述序列LPXTG(SEQ ID NO:106)。
71. 根据权利要求1所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段抑制或阻止内源性VWF与所述FVIII蛋白的结合。
72. 根据权利要求1-71中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段的所述D’结构域的所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2的第764至866位氨基酸具有至少90％的同一性。
73. 根据权利要求1至72中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段的所述D3结构域的所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2的第867至1240位氨基酸具有至少90％的同一性。
74. 根据权利要求1至73中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段包含在对应于SEQ ID NO:2的第1099位残基、第1142位残基或第1099和1142位残基二者的残基处的至少一个氨基酸替代。
75. 根据权利要求1至73中任一项所述的嵌合蛋白，其中在所述VWF片段的所述序列中，用除半胱氨酸之外的氨基酸替代对应于SEQ ID NO:2的第1099位残基、第1142位残基或第1099和1142位残基二者的残基。
76. 根据权利要求1至75中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段的所述序列包含SEQ ID NO:2的第764至1240位氨基酸。
77. 根据权利要求1至76中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述 VWF片段还包含VWF的所述D1结构域、所述D2结构域或所述D1和D2结构域。
78. 根据权利要求1至77中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段还包含选自由以下组成的组的VWF结构域：所述A1结构域、所述A2结构域、所述A3结构域、所述D4结构域、所述B1结构域、所述B2结构域、所述B3结构域、所述C1结构域、所述C2结构域、所述CK结构域、它们的一个或多个片段以及它们的任何组合。
79. 根据权利要求1至77中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段基本上由或由以下组成：(1)VWF的所述D'和D3结构域；(2)VWF的所述D1、D'和D3结构域；(3)VWF的所述D2、D'和D3结构域；(4)VWF的所述D1、D2、D'和D3结构域；或(5)VWF的所述D1、D2、D'、D3和A1结构域。
80. 根据权利要求1至79中任一项所述的嵌合蛋白，还包含VWF的与其可操作地连接的信号肽。
81. 根据权利要求1至80中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述嵌合蛋白是聚乙二醇化的、糖基化的、羟乙基淀粉化的或聚唾液酸化的。
82. 根据权利要求1至80中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含一个或多个选自由以下组成的组的FVIII的结构域：所述A1结构域、所述A2结构域、所述B结构域、所述A3结构域、所述C1结构域、所述C2结构域、它们的一个或多个片段以及它们的任何组合。
83. 根据权利要求82所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含所述A1结构域、所述A2结构域、所述A3结构域和所述C1结构域以及所述任选的C2结构域。
84. 根据权利要求82或83所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含所述B结构域或其部分。
85. 根据权利要求82至84中任一项所述的嵌合蛋白，其包含与SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:18具有至少60％的同一性的氨基酸序列。
86. 根据权利要求82至85中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白是SQ B结构域缺失的FVIII。
87. 根据权利要求82至86中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包括单链FVIII。
88. 根据权利要求87所述的嵌合蛋白，其中所述单链FVIII包含在对应于全长成熟因子VIII多肽(SEQ ID NO:16)的第1648位残基、第1645位残基或它们二者或SQ BDD因子VIII(SEQ ID NO:18)的第754位残基、第751位残基或它们二者的残基处的至少一个氨基酸替代。
89. 根据权利要求88所述的嵌合蛋白，其中所述氨基酸替代是除精氨酸之外的氨基酸。
90. 根据权利要求1至89中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含第一链和第二链，所述第一链包括FVIII的重链，并且所述第二链包括因子VIII的轻链，其中所述重链和所述轻链通过金属键缔合。
91. 编码根据权利要求1至90中任一项所述的嵌合蛋白的多核苷酸或一组多核苷酸。
92. 根据权利要求91所述的多核苷酸或多核苷酸组，其还包含编码PC5、PC7或弗林蛋白酶的另外多核苷酸序列。
93. 根据权利要求91或权利要求92所述的多核苷酸或多核苷酸组，其还包含编码VWF的D1结构域和D2结构域的另外多核苷酸序列。
94. 一种载体或一组载体，其包含根据权利要求91至93中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组和一个或多个可操作地连接至所述多核苷酸或所述多核苷酸组的启动子。
95. 根据权利要求94所述的一种载体或载体组，其还包括另外的载体，所述另外的载体包含编码PC5、PC7或弗林蛋白酶的第二多核苷酸链。
96. 根据权利要求94或权利要求95所述的一种载体或载体组，其还包括另外的载体，所述另外的载体包含编码VWF的D1结构域和D2结构域的多核苷酸序列。
97. 一种宿主细胞，其包含根据权利要求91至93中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组或根据权利要求94至96中任一项所述的载体。
98. 根据权利要求97所述的宿主细胞，其包含编码PC5、PC7或弗林蛋白酶的另外载体。
99. 根据权利要求97或权利要求98所述的宿主细胞，其还包含另外的载体，所述另外的载体包含编码VWF的D1结构域和D2结构域的多核苷酸序列。
100. 根据权利要求97至权利要求99中任一项所述的宿主细胞，其为哺乳动物细胞。
101. 根据权利要求100所述的宿主细胞，其中所述哺乳动物细胞选自由以下组成的组：HEK 293细胞、CHO细胞和BHK细胞。
102. 一种药物组合物，其包含根据权利要求1至90中任一项所述的嵌合蛋白、根据权利要求91至权利要求93中的任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组、或根据权利要求94至权利要求96中的任一项所述的载体或载体组或根据权利要求97至权利要求101中任一项所述的宿主细胞以及可药用载体。
103. 根据权利要求102所述的组合物，其中与无所述VWF片段的所述嵌合蛋白的所述FVIII蛋白的所述半衰期相比，所述嵌合蛋白的所述FVIII蛋白的所述半衰期在FVIII/VWF双敲除-小鼠中延长。
104. 根据权利要求102或权利要求103所述的组合物，其中所述FVIII的所述半衰期比野生型FVIII延长至少1.5倍。
105. 根据权利要求102至104中任一项所述的组合物，其中所述因子VIII的所述半衰期为至少6小时。
106. 根据权利要求102至105中任一项所述的组合物，其通过选自由以下组成的组的途径施用：局部施用、肠胃外施用和口服。
107. 根据权利要求106所述的组合物，其中所述肠胃外施用选自：静脉内施用、皮下施用、眼内施用、鞘内施用和硬膜下施用。
108. 根据权利要求102至107中任一项所述的组合物在制备用于治疗需要其的受试者的出血性疾病或病状的药物中的用途。
109. 根据权利要求108所述的用途，其中所述出血性疾病或病状选自由以下组成的组：出血性凝血障碍、溢血、创伤、骨折以及它们的任何组合。
110. 根据权利要求108或权利要求109所述的用途，其中所述受试者被安排经历外科手术。
111. 根据权利要求108或权利要求109中任一项所述的用途， 其中所述治疗是预防性的或发作期的。
112. 根据权利要求1至90中任一项所述的嵌合蛋白、根据权利要求91至93中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组、根据权利要求94至96中任一项所述的载体或载体组、根据权利要求97至101中任一项所述的宿主细胞或根据权利要求102至111中任一项所述的组合物在制备用于阻止或抑制FVIII蛋白与内源性VWF的相互作用的药物中的用途。
113. 根据权利要求102所述的组合物在制备用于移除或减少FVIII蛋白的半衰期限制因子的药物中的用途，其中所述嵌合蛋白或由所述多核苷酸或多核苷酸组、所述载体或所述载体组编码的或由所述宿主细胞表达的所述嵌合蛋白阻止或抑制在需要其的受试者中所述FVIII蛋白与内源性VWF的相互作用。
114. 根据权利要求102所述的组合物在制备用于延长或增加FVIII蛋白的所述半衰期的药物中的用途，其中所述嵌合蛋白的所述VWF片段阻止或抑制在需要其的受试者中所述FVIII蛋白与内源性VWF的相互作用。
115. 根据权利要求114所述的用途，其中所述FVIII蛋白的所述半衰期比野生型FVIII延长至少1.5倍。
116. 根据权利要求114所述的用途，其中因子VIII的所述半衰期为至少17小时。
117. 根据权利要求102所述的组合物在制备用于治疗需要其的受试者的出血性疾病或病状的药物中的用途，其中所述出血性疾病或病症选自由以下组成的组：出血性凝血障碍、关节出血症、溢血、创伤、骨折以及它们的任何组合。
118. 根据权利要求117所述的用途，其中所述组合物适用于预防性的或按需的(发作期)用途。
119. 根据权利要求112至118中任一项所述的用途，其中所述组合物的有效量为0.1μg/kg至500mg/kg。
120. 根据权利要求112至119中任一项所述的用途，其中所述药物适用于：局部施用、肠胃外施用和口服。
121. 根据权利要求120所述的用途，其中所述肠胃外施用选自由以下组成的组：静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、真皮内施用、鞘内施用、硬膜下施用和眼内施用。
122. 根据权利要求108至121中任一项所述的用途，其中所述受试者是人。
123. 根据权利要求122所述的用途，其中所述受试者患有甲型血友病。
124. 一种制备嵌合蛋白的方法，其包括用根据权利要求91至93中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组、或根据权利要求94至96中任一项所述的载体或载体组转染一种或多种宿主细胞，以及在所述宿主细胞中表达所述VWF片段或所述嵌合蛋白。
125. 根据权利要求124所述的方法，其中所述载体还包含编码加工酶的多核苷酸。
126. 根据权利要求125所述的方法，其中所述加工酶是PACE。
127. 根据权利要求126所述的方法，其中PACE切割所述VWF片段的所述D1D2结构域。
128. 根据权利要求124所述的方法，还包括用表达VWF的D1结构域和D2结构域的多核苷酸序列转染一种或多种宿主细胞。
129. 一种构建根据权利要求1至90中任一项所述的嵌合蛋白的方法，其包括在分选酶存在下通过共价键将所述VWF片段与所述 FVIII蛋白连接。”
驳回决定认为：权利要求1请求保护一种嵌合蛋白，对比文件2（WO2011/060242 A2，公开日：2011年05月19日，参见说明书第14页第4段-第15页、第34页第2-3段）公开了一种包含因子VIII(FVIII)蛋白和VWF的D'结构域和D3结构域的蛋白复合体。权利要求1与对比文件2的区别在于：前者是一种嵌合蛋白，利用共价键连接VWF片段和FVIII部分，且不结合清除受体；后者是一种vWF-Fc和FVIII的复合物。其实际解决的技术问题是：避免在体内解离的包含因子VIII(FVIII)蛋白和辅助部分蛋白。对比文件2（参见说明书第34页第2-3段）还公开了FVIII和vWF-Fc的融合蛋白的复合物在体内会发生解离，如果解离后FVIII被凝血酶切割，将无法达到损伤部分并发挥药效。而采用连接作用更强的共价键使FVIII和vWF-Fc的融合蛋白的结合更加稳定以避免在体内被解离也是本领域的常规手段，不结合清除受体属于功能性限定，当嵌合蛋白的结构对本领域技术人员来说是显而易见的时，其必然能够实现不结合清除受体的功能，因此，在对比文件2的基础上结合本领域常规手段得到权利要求1请求保护的技术方案对本领域技术人员来说是显而易见的，且发明并未产生预料不到的技术效果，权利要求1不具备专利法第22条第3款规定的创造性。权利要求2-90的附加技术特征或属于本领域的常规手段，或已被对比文件2所公开，因此，从属权利要求2-90不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。在其引用的权利要求不具备创造性的基础上，权利要求91-93请求保护的多核苷酸或一组多核苷酸，权利要求94-96请求保护的载体或一组载体，权利要求97-101请求保护的宿主细胞，权利要求102-107请求保护的组合物，权利要求108-123请求保护的用途，权利要求124-129请求保护的制备方法也不具备专利法第22条第3款规定的创造性。
申请人比奥贝拉蒂治疗公司（下称复审请求人）对上述驳回决定不服，于2018年03月09日向国家知识产权局提出了复审请求，同时提交了新权利要求书替换页（共19页，129项）。复审请求人认为：对比文件2并未教导以共价键的方式将VWF片段与FVIII连接，同时以共价键替代非共价键也并非本领域中的公知常识。相反，对比文件2公开了通过施用高浓度VW-Fc二聚体可以减轻FVIII和VWF-Fc的体内解离。因此，权利要求1-129具有创造性。
复审请求时新修改的权利要求1-2、32-33、39、57、67、71、79、111和113如下：
“1. 嵌合蛋白，其包括因子VIII(FVIII)蛋白和VWF片段，其中所述VWF片段包括VWF的D'结构域和D3结构域，且其不结合清除受体，且其中所述VWF片段通过共价键连接至所述FVIII蛋白。
2. 根据权利要求1所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段通过共价键间接连接至所述FVIII蛋白。
32. 根据权利要求1至30中任一项所述的嵌合蛋白，其包含选自由以下组成的组的式：
(m)V-L1-H1:H2-L2-C，
(n)V-L1-H1:C-L2-H2，
(o)H1-L1-V:H2-L2-C，
(p)H1-L1-V:C-L2-H2，
(q)V:C-L1-H1:H2，
(r)V:H1-L1-C:H2，
(s)H2:H1-L1-C:V，
(t)C:V-L1-H1:H2，和
(u)C:H1-L1-V:H2，
其中V是包含VWF的所述D’结构域和所述D3结构域的所述VWF片段；
L1是任选的连接基；
L2是任选的连接基；
H1是所述异源部分(H1)；
H2是所述第二异源部分(H2)；
C是FVIII蛋白；
(-)是肽键或一个或多个氨基酸；并且
(:)是所述H1和所述H2之间的共价键。
33. 根据权利要求31或权利要求32所述的嵌合蛋白，其中除所述共价键、所述肽键或所述一个或多个氨基酸之外，所述VWF片段和所述FVIII蛋白还能通过非共价键彼此缔合。
39. 根据权利要求36所述的嵌合蛋白，其中所述非多肽部分包括聚乙二醇(PEG)、聚唾液酸、羟乙基淀粉(HES)、其衍生物或它们的任何组合。
57. 根据权利要求5至56中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白和所述第二异源部分(H2)之间的所述连接基、所述VWF片段和所述第一异源部分(H1)之间的所述连接基或它们二者包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：RRRR(SEQ ID NO:52)、RKRRKR(SEQ ID NO:53)、RRRRS(SEQ ID NO:54)、TQSFNDFTR(SEQ ID NO:47)、SVSQTSKLTR(SEQ ID NO:48)、DFLAEGGGVR(SEQ ID NO:49)、TTKIKPR(SEQ ID NO:50)、LVPRG(SEQ ID NO:55)、ALRPRVVGGA(SEQ ID NO:51)、KLTRAET(SEQ ID NO:29)、DFTRVVG(SEQ ID NO:30)、TMTRIVGG(SEQ ID NO:31)、SPFRSTGG(SEQ ID NO:32)、LQVRIVGG(SEQ ID N O:33)、PLGRIVGG(SEQ ID NO:34)、IEGRTVGG(SEQ ID NO:35)、LTPRSLLV(SEQ ID NO:36)、LGPVSGVP(SEQ ID NO:37)、VAGDSLEE(SEQ ID NO:38)、GPAGLGGA(SEQ ID NO:39)、GPAGLRGA(SEQ ID NO:40)、APLGLRLR(SEQ ID NO:41)、PALPLVAQ(SEQ ID NO:42)、ENLYFQG(SEQ ID NO:43)、DDDKIVGG(SEQ ID NO:44)、LEVLFQGP(SEQ ID NO:45)和LPKTGSES(SEQ ID NO:46)。
67. 根据权利要求64至66中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基被选自由以下组成的组的蛋白酶切割：因子XIa、因子XIIa、激肽释放酶、因子VIIa、因子IXa、因子Xa、因子IIa(凝血酶)、弹性蛋白酶-2、粒酶-B、TEV、肠激酶、蛋白酶3C、分选酶A、MMP-12、MMP-13、MMP-17和MMP-20。
71. 根据权利要求1-71中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段抑制或阻止内源性VWF与所述FVIII蛋白的结合。
79. 根据权利要求1至77中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段主要由或由以下组成：(1)VWF的所述D'和D3结构域；(2)VWF的所述D1、D'和D3结构域；(3)VWF的所述D2、D'和D3结构域；(4)VWF的所述D1、D2、D'和D3结构域；或(5)VWF的所述D1、D2、D'、D3和A1结构域。
111. 根据权利要求108或权利要求109所述的用途，其中所述治疗是预防性的或发作期的。
113. 根据权利要求102所述的组合物在制备用于移除或减少FVIII蛋白的半衰期限制因子的药物中的用途，其中所述嵌合蛋白或由所述多核苷酸或多核苷酸组、所述载体或所述载体组编码的所述嵌合蛋白或由所述宿主细胞表达的所述嵌合蛋白阻止或抑制在需要其的受试者中所述FVIII蛋白与内源性VWF的相互作用。”
经形式审查合格，国家知识产权局于2018年04月19日依法受理了该复审请求，并将其转送至原审查部门进行前置审查。
原审查部门在前置审查意见书中认为，对比文件2公开了FVIII和vWF-FC形成的复合物会在体内发生解离进而影响其效果。而本领域中公知，共价键是不可逆键和，其连接作用要强于非共价键（如公知常识（《药物研究中分子识别》，杨铭等，第6-8页，1999年3月）。因而本领域技术人员为了进一步提高FVIII蛋白-VWF复合物的稳定性以及效果，有动机采用连接作用更强的共价键将VWF片段与FVIII蛋白连接，以保持其活性的常规属性，如不结合清除受体，其效果是完全能够预期的。因而坚持原驳回决定。
随后，国家知识产权局成立合议组对本案进行审理。
合议组于2019年01 月04 日向复审请求人发出复审通知书，指出：（1）对比文件2（参见说明书第14页第4段和第32页第3段）公开了一种包含因子VIII蛋白和VWF的D’结构域和D3结构域的蛋白复合体。权利要求1与对比文件2相比的区别在于：前者是一种嵌合蛋白，利用共价键连接VWF片段和FVIII部分，且不结合清除受体；后者是一种vWF-Fc和FVIII的复合物。其实际解决的技术问题是：提供一种避免在体内解离的嵌合蛋白。对比文件2还公开了重组vWF-Fc融合多肽可以用作重组或血浆来源FVIII的添加剂促进延长FVIII和/或组合复合体的半衰期。Fc区融合至截断的vWF部分以提供FVIII结合并且Fc区还提供给复合物以额外的半衰期。以过量vWF-Fc融合蛋白补充复合体以便增加血浆中的融合多肽浓度，并且当在血浆中解离时提供FVIII以再结合至vWF-Fc融合蛋白（参见说明书第34页第2段）。由此可见，本领域技术人员基于对比文件2能够意识到vWF-Fc融合蛋白与FVIII结合时能够延长其半衰期，以及在体内FVIII:重组vWF复合体存在着因复合体发生解离从而导致FVIII失去保护的技术问题。而通过共价或非共价连接将两个需同时使用的生物学活性分子制备成嵌合分子或复合物以便发挥其功效均属于本领域的常规技术手段，以及当本领域技术人员已经意识到非共价连接的两个分子容易发生解离时，能够借鉴本领域常见的将两个同时使用的分子固定在一起的融合蛋白、双抗和/或ADC药物等已知的普通技术知识，从而有动机采用肽键直接连接、柔性肽、Fc片段的二硫键和/或化学合成的连接子等常规技术手段将两个分子连接成一体，以减少分子间的解离或促进解离后的再结合，进而实现提高两分子之间结合稳定性的技术效果。即在对比文件2的基础上结合本领域的普通技术知识和常规技术手段，本领域技术人员有动机使用共价键连接vWF片段和FVIII蛋白，其具有的“不结合清除受体”的技术效果也是可以预料到的。因此，权利要求1不具备突出的实质性特点和显著的进步，不符合专利法第22条第3款的规定。权利要求2-129的技术方案，或属于本领域常规技术手段，或已经由对比文件2所公开，或是根据对比文件2所公开的内容本领域技术人员容易想到的技术方案，权利要求2-129不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。（2）对于意见陈述，合议组认为：对比文件2公开的提高浓度的技术方案不构成技术障碍或反向教导，本领域技术人员基于普通技术知识能够想到将两分子固定在一起的共价结合的方式可以减少解离或促进再结合。
复审请求人于2019 年04月19日提交了意见陈述书和修改的权利要求书全文替换页（共12页，94项）。修改后的权利要求书如下：
“1. 嵌合蛋白，其包括(i)因子VIII(FVIII)蛋白和(ii)VWF片段，
其中所述FVIII蛋白包括成熟人FVIII蛋白(SEQ ID NO:16)的A1结构域、A2结构域、A3结构域、C1结构域和C2结构域，以及任选地包括连接至所述人FVIII蛋白的Fc结合伴侣；以及
其中所述VWF片段包括：
(a)人VWF(SEQ ID NO:2)的D'结构域和D3结构域(D'D3结构域)，
(b)连接至所述人VWF的FcRn结合伴侣，以及
(c)在所述人VWF和所述FcRn结合伴侣之间的连接基，以及
其中所述VWF片段通过共价键连接至所述FVIII蛋白，
其中所述VWF片段通过掩蔽或阻断在所述FVIII蛋白上的VWF结合位点来抑制或防止内源性VWF结合所述FVIII蛋白。
2. 根据权利要求1所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段通过共价键间接连接至所述FVIII蛋白。
3. 根据权利要求1或2所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段是单体。
4. 根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段包括彼此之间一个或多个连接的两个、三个、四个、五个或六个VWF片段。
5. 嵌合蛋白，其包括(i)因子VIII(FVIII)蛋白和(ii)VWF片段，
其中所述FVIII蛋白包括：
(a)成熟人FVIII蛋白(SEQ ID NO:16)的A1结构域、A2结构域、A3结构域、C1结构域和C2结构域，以及
(b)连接至所述人FVIII蛋白的Fc结合伴侣；
其中所述VWF片段包括：
(a)人VWF(SEQ ID NO:2)的D'结构域和D3结构域(D'D3结构域)，
(b)连接至所述人VWF的FcRn结合伴侣，以及
(c)在所述人VWF和所述FcRn结合伴侣之间的连接基，以及
其中所述VWF片段通过共价键连接至所述FVIII蛋白。
6. 根据权利要求1或5所述的嵌合蛋白，其中所述FcRn结合伴侣中的一个或二者包括多肽、非多肽部分或它们二者。
7. 根据权利要求6所述的嵌合蛋白，其中所述FcRn结合伴侣中的一个或二者包括延长所述FVIII蛋白的所述半衰期的部分。
8. 根据权利要求6所述的嵌合蛋白，其中所述非多肽部分包括聚乙二醇(PEG)、聚唾液酸、羟乙基淀粉(HES)或它们的任何组合。
9. 根据权利要求1或5所述的嵌合蛋白，其中所述FcRn结合伴侣中的一个或二者包括Fc区。
10. 根据权利要求7所述的嵌合蛋白，其中所述FcRn结合伴侣中的一个或二者包括包含至少50个氨基酸的氨基酸序列。
11. 根据权利要求1至10中任一项所述的嵌合蛋白，其中在所述VWF片段上的所述连接基是可切割的连接基。
12. 根据权利要求11所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含一个或多个可切割位点。
13. 根据权利要求11或权利要求12所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基能够被选自由以下组成的组的蛋白酶切割：因子XIa、因子XIIa、激肽释放酶、因子VIIa、因子IXa、因子Xa、因子IIa(凝血酶)、弹性蛋白酶-2、粒酶-B、TEV、肠激酶、蛋白酶3C、分选酶A、MMP-12、MMP-13、MMP-17和MMP-20。
14. 根据权利要求11至13中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含一个或多个切割位点，所述切割位点包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：RRRR(SEQ ID NO:52)、RKRRKR(SEQ ID NO:53)、RRRRS(SEQ ID NO:54)、TQSFNDFTR(SEQ ID NO:47)、SVSQTSKLTR(SEQ ID NO:48)、DFLAEGGGVR(SEQ ID NO:49)、TTKIKPR(SEQ ID NO:50)、LVPRG(SEQ ID NO:55)、ALRPRVVGGA(SEQ ID NO:51)、KLTRAET(SEQ ID NO:29)、DFTRVVG(SEQ ID NO:30)、TMTRIVGG(SEQ ID NO:31)、SPFRSTGG(SEQ ID NO:32)、LQVRIVGG(SEQ ID NO:33)、PLGRIVGG(SEQ ID NO:34)、IEGRTVGG(SEQ ID NO:35)、LTPRSLLV(SEQ ID NO:36)、LGPVSGVP(SEQ ID NO:37)、VAGDSLEE(SEQ ID NO:38)、GPAGLGGA(SEQ ID NO:39)、GPAGLRGA(SEQ ID NO:40)、APLGLRLR(SEQ ID NO:41)、PALPLVAQ(SEQ ID NO:42)、ENLYFQG(SEQ ID NO:43)、DDDKIVGG(SEQ ID NO:44)、LEVLFQGP(SEQ ID NO:45)和LPKTGSES(SEQ ID NO:46)。
15. 根据权利要求1至14中任一项所述的嵌合蛋白，所述嵌合蛋白包含第一多肽链和第二多肽链，所述第一多肽链包含所述VWF片段、FcRn结合伴侣和连接基，所述第二多肽链包含所述FVIII蛋白和异源部分(H1)，其中所述第一多肽链和所述第二多肽链通过共价键彼此连接。
16. 根据权利要求15所述的嵌合蛋白，其中所述FcRn结合伴侣和所述异源部分(H1)通过所述共价键彼此连接，其中所述共价键防止体内所述第一多肽链中的所述VWF片段被内源性VWF替换。
17. 根据权利要求16所述的嵌合蛋白，其中所述共价键是二硫键。
18. 根据权利要求1至17中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白进一步包括(c)在所述人FVIII蛋白和所述FcRn结合伴侣之间的连接基。
19. 根据权利要求18所述的嵌合蛋白，其中在所述FVIII蛋白和所述FcRn结合伴侣之间的所述连接基是可切割的连接基。
20. 根据权利要求18至19中任一项所述的嵌合蛋白，其中连接至所述人FVIII蛋白的所述FcRn结合伴侣和连接至所述人VWF的所述FcRn结合伴侣通过连接基连接。
21. 根据权利要求20所述的嵌合蛋白，其中所述连接基是scFc连接基。
22. 根据权利要求21所述的嵌合蛋白，其中所述scFc连接基是可加工的连接基。
23. 根据权利要求1或权利要求5所述的嵌合蛋白，其中除所述共价键、所述肽键或所述一个或多个氨基酸之外，所述VWF片段和所述FVIII蛋白通过非共价键彼此缔合。
24. 根据权利要求1至23中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白进一步包含一或多个异源部分。
25. 根据权利要求24所述的嵌合蛋白，其中所述一或多个异源部分能够延长所述FVIII蛋白的所述半衰期。
26. 根据权利要求24所述的嵌合蛋白，其中所述一或多个异源部分连接至所述FVIII蛋白的所述C末端或N末端或插入所述FVIII蛋白的两个氨基酸之间。
27. 根据权利要求24所述的嵌合蛋白，其中所述一或多个异源部分包括包含至少50个氨基酸的氨基酸序列。
28. 根据权利要求1至27中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII的所述半衰期比野生型FVIII延长至少1.5倍。
29. 根据权利要求1至28中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白的所述半衰期为至少10小时。
30. 根据权利要求11或19所述的嵌合蛋白，其中在所述人VWF和所述人FVIII蛋白和所述FcRn结合伴侣之间的所述连接基和/或在所述人VWF和所述FcRn结合伴侣之间的所述连接基还包含位于所述连接基的所述N-末端区的第一切割位点(P1)、位于所述连接基的所述C-末端区的第二切割位点(P2)或它们二者。
31. 根据权利要求11或19所述的嵌合蛋白，其中在所述人VWF和所述人FVIII蛋白和所述FcRn结合伴侣之间的所述连接基和/或在所述人VWF和所述FcRn结合伴侣之间的所述连接基包含TLDPRSFLLRNPNDKYEPFWEDEEK(SEQ ID NO:56)。
32. 根据权利要求1至31中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述连接基中的一者或多者具有1至2000个氨基酸的长度。
33. 根据权利要求1至32中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述连接基中的一者或多者具有至少10个氨基酸的长度。
34. 根据权利要求1至33中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述连接基中的一者或多者包含gly/ser肽。
35. 根据权利要求34所述的嵌合蛋白，其中所述gly/ser肽具有式(Gly4Ser)n或S(Gly4Ser)n，其中n为选自由以下组成的组的正整数：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80或100。
36. 根据权利要求35所述的嵌合蛋白，其中所述(Gly4Ser)n连接基是(Gly4Ser)3或(Gly4Ser)4。
37. 根据权利要求1至36中任一项所述的嵌合蛋白，其中在所述FVIII蛋白和所述VWF片段之间的所述连接基是可切割的连接基。
38. 根据权利要求37所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含一个或多个凝血酶切割位点。
39. 根据权利要求37或权利要求38所述的嵌合蛋白，其中所述可切割的连接基包含TLDPRSFLLRNPNDKYEPFWEDEEK(SEQ ID NO:56)。
40. 根据权利要求1-39中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段抑制或阻止内源性VWF与所述FVIII蛋白的结合。
41. 根据权利要求1-40中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段的所述D’结构域的所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2的第764至866位氨基酸具有至少90％的同一性。
42. 根据权利要求1至41中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段的所述D3结构域的所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2的第 867至1240位氨基酸具有至少90％的同一性。
43. 根据权利要求1至42中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段包含在对应于SEQ ID NO:2的第1099位残基、第1142位残基或第1099和1142位残基二者的残基处的至少一个氨基酸替代。
44. 根据权利要求1至42中任一项所述的嵌合蛋白，其中在所述VWF片段的所述序列中，用除半胱氨酸之外的氨基酸替代对应于SEQ ID NO:2的第1099位残基、第1142位残基或第1099和1142位残基二者的残基。
45. 根据权利要求1至44中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段的所述序列包含SEQ ID NO:2的第764至1240位氨基酸。
46. 根据权利要求1至45中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段还包含VWF的所述D1结构域、所述D2结构域或所述D1和D2结构域。
47. 根据权利要求1至46中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述VWF片段还包含选自由以下组成的组的人FVIII蛋白结构域：所述A1结构域、所述A2结构域、所述A3结构域、所述D4结构域、所述B1结构域、所述B2结构域、所述B3结构域、所述C1结构域、所述C2结构域、所述CK结构域、它们的一个或多个片段以及它们的任何组合。
48. 根据权利要求1至47中任一项所述的嵌合蛋白，还包含VWF的与其可操作地连接的信号肽。
49. 根据权利要求48所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含人FVIII蛋白的所述B结构域或其部分。
50. 根据权利要求49所述的嵌合蛋白，其包含与SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:18具有至少60％的同一性的氨基酸序列。
51. 根据权利要求49或50所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白是SQ B结构域缺失的FVIII。
52. 根据权利要求49或51所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包括单链FVIII。
53. 根据权利要求52所述的嵌合蛋白，其中所述单链FVIII包含在对应于全长成熟因子VIII多肽(SEQ ID NO:16)的第1648位残基、第1645位残基或它们二者或SQ BDD因子VIII(SEQ ID NO:18)的第754位残基、第751位残基或它们二者的残基处的至少一个氨基酸替代。
54. 根据权利要求53所述的嵌合蛋白，其中所述氨基酸替代是除精氨酸之外的氨基酸。
55. 根据权利要求1至54中任一项所述的嵌合蛋白，其中所述FVIII蛋白包含第一链和第二链，所述第一链包括FVIII的重链，并且所述第二链包括因子VIII的轻链，其中所述重链和所述轻链通过金属键缔合。
56. 编码根据权利要求1至55中任一项所述的嵌合蛋白的多核苷酸或一组多核苷酸。
57. 根据权利要求56所述的多核苷酸或多核苷酸组，其还包含编码PC5、PC7或弗林蛋白酶的另外多核苷酸序列。
58. 根据权利要求56或权利要求57所述的多核苷酸或多核苷酸组，其还包含编码VWF的D1结构域和D2结构域的另外多核苷酸序列。
59. 一种载体或一组载体，其包含根据权利要求56至58中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组和一个或多个可操作地连接至所述多核苷酸或所述多核苷酸组的启动子。
60. 根据权利要求59所述的一种载体或载体组，其还包括另外的载体，所述另外的载体包含编码PC5、PC7或弗林蛋白酶的第二多核苷酸链。
61. 根据权利要求59或权利要求60所述的一种载体或载体组，其还包括另外的载体，所述另外的载体包含编码VWF的D1结构域和D2结构域的多核苷酸序列。
62. 一种宿主细胞，其包含根据权利要求56至58中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组或根据权利要求59至61中任一项所述的载体。
63. 根据权利要求62所述的宿主细胞，其包含编码PC5、PC7或弗林蛋白酶的另外载体。
64. 根据权利要求62或权利要求63所述的宿主细胞，其还包含另外的载体，所述另外的载体包含编码VWF的D1结构域和D2结构域的多核苷酸序列。
65. 根据权利要求62至64中任一项所述的宿主细胞，其为哺乳动物细胞。
66. 根据权利要求65所述的宿主细胞，其中所述哺乳动物细胞选自由以下组成的组：HEK 293细胞、CHO细胞和BHK细胞。
67. 一种药物组合物，其包含根据权利要求1至55中任一项所述的嵌合蛋白、根据权利要求56至58中的任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组、或根据权利要求59至61中的任一项所述的载体或载体组或根据权利要求62至66中任一项所述的宿主细胞以及可药用载体。
68. 根据权利要求67所述的组合物，其中与无所述VWF片段的所述嵌合蛋白的所述FVIII蛋白的所述半衰期相比，所述嵌合蛋白的 所述FVIII蛋白的所述半衰期在FVIII/VWF双敲除-小鼠中延长。
69. 根据权利要求67或权利要求68所述的组合物，其中所述FVIII的所述半衰期比野生型FVIII延长至少1.5倍。
70. 根据权利要求67至69中任一项所述的组合物，其中所述因子VIII的所述半衰期为至少6小时。
71. 根据权利要求67至70中任一项所述的组合物，其通过选自由以下组成的组的途径施用：局部施用、肠胃外施用和口服。
72. 根据权利要求71所述的组合物，其中所述肠胃外施用选自：静脉内施用、皮下施用、眼内施用、鞘内施用和硬膜下施用。
73. 根据权利要求67至72中任一项所述的组合物在制备用于治疗需要其的受试者的出血性疾病或病状的药物中的用途。
74. 根据权利要求73所述的用途，其中所述出血性疾病或病状选自由以下组成的组：出血性凝血障碍、溢血、创伤、骨折以及它们的任何组合。
75. 根据权利要求73或74所述的用途，其中所述受试者被安排经历外科手术。
76. 根据权利要求73或74所述的用途，其中所述治疗是预防性的或发作期的。
77. 根据权利要求1至55中任一项所述的嵌合蛋白、根据权利要求56至58中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组、根据权利要求59至61中任一项所述的载体或载体组、根据权利要求62至66中任一项所述的宿主细胞或根据权利要求67至72中任一项所述的组合物在制备用于阻止或抑制FVIII蛋白与内源性VWF的相互作用的药物中的用途。
78. 根据权利要求67所述的组合物在制备用于移除或减少FVIII蛋白的半衰期限制因子的药物中的用途，其中所述嵌合蛋白或由所述多核苷酸或多核苷酸组、所述载体或所述载体组编码的所述嵌合蛋白或由所述宿主细胞表达的所述嵌合蛋白阻止或抑制在需要其的受试者中所述FVIII蛋白与内源性VWF的相互作用。
79. 根据权利要求67所述的组合物在制备用于延长或增加FVIII蛋白的所述半衰期的药物中的用途，其中所述嵌合蛋白的所述VWF片段阻止或抑制在需要其的受试者中所述FVIII蛋白与内源性VWF的相互作用。
80. 根据权利要求79所述的用途，其中所述FVIII蛋白的所述半衰期比野生型FVIII延长至少1.5倍。
81. 根据权利要求79所述的用途，其中因子VIII的所述半衰期为至少17小时。
82. 根据权利要求67所述的组合物在制备用于治疗需要其的受试者的出血性疾病或病状的药物中的用途，其中所述出血性疾病或病症选自由以下组成的组：出血性凝血障碍、关节出血症、溢血、创伤、骨折以及它们的任何组合。
83. 根据权利要求82所述的用途，其中所述组合物适用于预防性的或按需的(发作期)用途。
84. 根据权利要求77至83中任一项所述的用途，其中所述组合物的有效量为0.1μg/kg至500mg/kg。
85. 根据权利要求77至84中任一项所述的用途，其中所述药物适用于：局部施用、肠胃外施用和口服。
86. 根据权利要求85所述的用途，其中所述肠胃外施用选自由以下组成的组：静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、真皮内施用、 鞘内施用、硬膜下施用和眼内施用。
87. 根据权利要求73至86中任一项所述的用途，其中所述受试者是人。
88. 根据权利要求87所述的用途，其中所述受试者患有甲型血友病。
89. 一种制备嵌合蛋白的方法，其包括用根据权利要求56至58中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸组、或根据权利要求59至61中任一项所述的载体或载体组转染一种或多种宿主细胞，以及在所述宿主细胞中表达所述VWF片段或所述嵌合蛋白。
90. 根据权利要求89所述的方法，其中所述载体还包含编码加工酶的多核苷酸。
91. 根据权利要求90所述的方法，其中所述加工酶是PACE。
92. 根据权利要求91所述的方法，其中PACE切割所述VWF片段的所述D1D2结构域。
93. 根据权利要求89所述的方法，还包括用表达VWF的D1结构域和D2结构域的多核苷酸序列转染一种或多种宿主细胞。
94. 一种构建根据权利要求1至55中任一项所述的嵌合蛋白的方法，其包括在分选酶存在下通过共价键将所述VWF片段与所述FVIII蛋白连接。”
复审请求人认为：对比文件2教导补充过量VWF-Fc以防止解离，并没有公开或教导通过用共价键连接VWF来进行阻止或掩蔽从而防止内源性VWF与FVIII相互作用，因此，修改后的权利要求1具备创造性。对比文件2没有公开具有与人FVIII蛋白连接的FcRn结合伴侣特征的嵌合蛋白。因此，权利要求5具备创造性。基于相同的理由，直接或间接引用上述权利要求的权利要求2-4、6-94也具备创造性。
在上述程序的基础上，合议组认为本案事实已经清楚，可以作出审查决定。
二、决定的理由
（一）审查文本的认定
复审请求人于2019年04月19日提交了权利要求书的全文替换页（共12页，94项）。经审查，所作修改符合专利法第33条和专利法实施细则第61条第1款的规定。因此，本复审请求审查决定所针对的文本为：2014年09月10日本申请进入中国国家阶段是提交的国际申请文件的中文译文的说明书第1-188页（即第1-952段）、说明书附图第1-32页（即图1-图26）、说明书摘要、摘要附图、说明书核苷酸和氨基酸序列表第1-124页；以及2019年04月19日提交的权利要求第1-94项。
（二）关于专利法第22条第3款
专利法第22条第3款规定：创造性，是指与现有技术相比，该发明具有突出的实质性特点和显著的进步。
当要求保护的技术方案相对于最接近的现有技术存在区别特征时，如果现有技术中给出了将上述区别特征应用到该最接近的现有技术以解决其存在的技术问题的启示，这种启示使得本领域技术人员在面对所述技术问题时，有动机改进该最接近的现有技术并获得要求保护的发明，则所述技术方案是显而易见的。
1、权利要求1请求保护一种嵌合蛋白。对比文件2是最接近的现有技术，其公开了一种融合蛋白vWF-FC以及包含融合蛋白的FVIII:重组vWF复合体，其中融合蛋白的vWF部分是缺少成熟全长vWF多肽的至少一个结构域的截断vWF，融合蛋白能够形成结合FVIII蛋白质的多聚体，截断的vWF具有结构域D’和D3，缺乏结构域A1、A2、A3、D4、B1、B2、B3、C1、C2、CK或其组合，vWF和Fc之间可以有将二者分隔开的包含一个或者更多个氨基酸残基的连接体，vWF和FVIII可以是人来源的天然的、人工合成的和重组的蛋白质，FVIII可以是血浆或者血清来源的，抗体Fc多肽可以是人IgG1 Fc区。与免疫球蛋白Fc部分偶联的截断形式vWF以与完整vWF分子类似的方式在表达和生产过程中与FVIII复合并保护FVIII（即所述VWF片段通过掩蔽或阻断在所述FVIII蛋白上的VWF结合位点来抑制或防止内源性VWF结合所述FVIII蛋白）（参见说明书第7页第4段-第9页第3段，第11页第2和6段，第12页第1段，第14页第4段和第32页第3-4段），即对比文件2公开了一种融合蛋白vWF-FC以及包含融合蛋白的FVIII:重组vWF复合体，其中融合蛋白vWF-Fc包含VWF的D’D3结构域、连接至VWF的Fc（即FcRn结合伴侣的下位概念）、在VWF和Fc之间的连接体（即连接基），vWF可以是人vWF。且本领域公知，人FVIII包括3个A结构域、一个B结构域和2个C结构域组成，各区的排列顺序为A1-A2-B-A3-C1-C2，从血浆中及从重组细胞培养上清中分离纯化得到的FVIII是由两条肽链所组成，重链有A1-A2-B或A1-A2组成，轻链由A3-C1-C2组成，且B结构域对FVIII的凝血活性并非必需，即对比文件2隐含公开了FVIII包括成熟人FVIII蛋白的A1结构域、A2结构域、A3结构域、C1结构域和C2结构域。权利要求1请求保护的技术方案与对比文件2相比的区别特征在于：（1）前者是一种嵌合蛋白，利用共价键连接VWF片段和FVIII部分；后者是一种vWF-Fc和FVIII的复合物。（2）任选的，权利要求1还包括连接至所述人FVIII蛋白的Fc结合伴侣。基于上述区别技术特征，权利要求1实际解决的技术问题是：提供一种避免在体内解离的嵌合蛋白。
首先，对比文件2还公开了，重组vWF-Fc融合多肽可以用作重组或血浆来源FVIII的添加剂促进延长FVIII和/或组合复合体的半衰期。Fc区融合至截断的vWF部分以提供FVIII结合并且Fc区还提供给复合物以额外的半衰期。以过量vWF-Fc融合蛋白补充复合体以便增加血浆中的融合多肽浓度，并且当在血浆中解离时提供FVIII以再结合至vWF-Fc融合蛋白（参见说明书第34页第2段）。由此可见，本领域技术人员基于对比文件2能够意识到vWF-Fc融合蛋白与FVIII结合时能够延长其半衰期，以及在体内FVIII:重组vWF复合体存在着因复合体发生解离从而导致FVIII失去保护的技术问题。而通过共价或非共价连接将两个需同时使用的生物学活性分子制备成嵌合分子或复合物以便发挥其功效均属于本领域的常规技术手段，以及当本领域技术人员已经意识到非共价连接的两个分子容易发生解离时，能够借鉴本领域常见的将两个同时使用的分子固定在一起的融合蛋白、双抗和/或ADC药物等已知的普通技术知识，从而有动机采用肽键直接连接、柔性肽、Fc片段的二硫键和/或化学合成的连接子等常规技术手段将两个分子连接成一体，以减少分子间的解离或促进解离后的再结合，进而实现提高两分子之间结合稳定性的技术效果。其次，出于延长半衰期或构建FVIII-Fc融合蛋白以利用Fc片段的二硫键将其与vWF-Fc融合蛋白相互连接的目的，本领域技术人员有动机任选地在人FVIII蛋白连接Fc片段。即，在对比文件2的基础上结合本领域的普通技术知识和常规技术手段，本领域技术人员有动机使用共价键连接vWF片段和FVIII蛋白，并任选地在人FVIII蛋白连接Fc片段。因此，权利要求1不具备专利法第22条第3款规定的创造性。
同理，权利要求5也不具备专利法第22条第3款规定的创造性。
2、权利要求2限定了所述VWF片段通过共价键间接连接至所述FVIII部分，然而如针对权利要求1的评述中所述，通过柔性肽、Fc片段的二硫键、和/或化学合成的连接子等间接连接两个分子均属于本领域的常规手段。
权利要求3-4限定了VWF片段的数量，然而对比文件2（参见说明书第7页第3段）还公开了，在一些实施方案中，多肽能够作为二聚体、三聚体、四聚体或者更高级别聚合复合体“结合”FVIII。由此可见，对比文件2实际上公开了vWF片段是单体，或者包括彼此之间一个或多个连接的两个、三个、四个或者更多的vWF片段。因此，权利要求3-4的附加技术特征已经被对比文件2公开，而五个或六个片段是本领域技术人员可以常规选择的。
权利要求6-10对FcRn结合伴侣进行了进一步的限定，然而，一方面，如针对权利要求1的评述中所述，对比文件2公开了FcRn结合伴侣为Fc片段，能够延长FVIII的半衰期，vWF与Fc片段之间可以有任选的连接基，并隐含公开了FcRn结合伴侣包含至少50个氨基酸（例如Genbank登录号X70421编码255个氨基酸）。另一方面，对比文件2还公开了，本发明多肽的片段、衍生物或类似物包括例如另一化合物（例如聚乙二醇）偶联以提高多肽半衰期（参见说明书第13页第2段）。因而，对比文件2给出的技术启示。
权利要求11-14对连接基进行了进一步限定。而采用可切割的连接基，例如凝血酶可切割连接基制备嵌合蛋白是本领域的常规选择，其能够具有的可以使嵌合蛋白可分割的技术效果也是可以预料到的技术效果，权利要求12-14所列出具体切割位点的个数和结构、蛋白酶种类、连接基的序列结构均为本领域的常规选择。
权利要求15-17对第二多肽链进行了进一步限定，如针对权利要求1的评述中所述，本领域技术人员有动机在人FVIII蛋白连接Fc片段，其能够通过二硫键与FcRn结合伴侣连接是可以预料到的技术效果。
权利要求18-40是对嵌合蛋白的进一步限定，基于评述权利要求1-17的相同或相似理由，上述特征或者被对比文件2公开，或者对比文件2给出了技术启示，或者属于本领域常规手段，其中，将嵌合蛋白的各个组分利用常见连接基进行连接是本领域的常规技术手段，具体的连接基结构和连接顺序是本领域技术人员根据需要可以常规选择的，VWF和FVIII通过非共价键结缔合已经被对比文件2公开。
权利要求41-47是对vWF片段结构的进一步限定，权利要求48进一步限定了包含信号肽，如针对权利要求1的评述中所述，对比文件2已经公开了vWF可以是D’和D3的截断vWF片段，且对比文件2还公开了一系列vWF多肽序列以及截断、同一性和取代限定的变体，以及在vWF上可操作地连接信号肽（参见说明书第10页第4段、第12页第3段、第13页第2段、第14页第1-4段、第15页第2-3段），其他变体也是本领域的常规选择；因而上述特征或被对比文件2公开或属于本领域常规手段。
权利要求49-55是对FVIII蛋白结构的进一步限定，其均属于本领域常规可以选用的FVIII蛋白结构。
综上，在其引用的权利要求不具备创造性的基础上，权利要求2-55不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。
3、权利要求56-58请求保护编码嵌合蛋白的多核苷酸或一组多核苷酸；权利要求59-61请求保护包含多核苷酸或多核苷酸组的载体或一组载体；权利要求62-66请求保护包含多核苷酸、多核苷酸组或载体的宿主细胞。然而，根据密码子规则确定编码嵌合蛋白的多核苷酸，将多核苷酸构建为载体，将多核苷酸或载体构建为宿主细胞均是本领域的常规技术手段；出于相应功能的需要在多核苷酸、载体或宿主细胞中增加PC5等序列是本领域的常规技术手段；对比文件2还公开了载体包含编码VWF前肽的多核苷酸序列，并公开了前肽对应于与VWF的D1和D2结构域（参见图1），本领域技术人员可以常规选择所述多核苷酸、载体或宿主细胞中包含D1和D2结构域；在多核苷酸或多核苷酸组上可操作地连接启动子是本领域的常规技术手段；HEK293等哺乳动物细胞也是本领域表达外源蛋白常规使用的宿主细胞；且，对比文件2也公开了一系列常规使用的多核苷酸、载体和宿主细胞（参见说明书第14页第5段-第26页第2段）。因此，在其引用的权利要求不具备创造性的基础上，权利要求56-66不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。
4、权利要求67-72请求保护一种药物组合物，然而，（1）根据FVIII因子的治疗活性，本领域技术人员有动机将将包含FVIII因子的嵌合多肽，或编码上述多肽的多核苷酸或多核苷酸组；以及表达上述多肽的载体或宿主细胞加入药用载体制备成药用组合物；（2）权利要求68-70进一步对组合物的效果进行了描述，没有证据表明该效果对组合物的结构和/或组成产生实质性限定，且如针对权利要求1的评述中所述，嵌合蛋白的半衰期延长是可以预期的，具体延长效果是可以通过常规测量可以确定的；（3）首先，对比文件2经公开了通过静脉注射给药或肠胃外给药（参见说明书第34页第3段至第35页第1段），而权利要求71-72限定的其他给药途径也是本领域常见的给药方式，可以常规选择。因此，权利要求67-72不符合专利法第22条第3款规定的创造性。
5、权利要求73-88请求保护制药用途。然而，首先，对比文件2已经公开了利用复合物治疗血友病A（即出血性疾病或出血性凝血障碍的下位概念），以及剂量随出血发作的严重性而变（即发作期）(参见说明书第35页第1段)；其次，嵌合蛋白、多核苷酸或多核苷酸组、载体或载体组、宿主细胞能够用于阻止或抑制FVIII蛋白与内源性VWF的相互作用或延长FVIII半衰期是本领域技术人员根据对比文件2公开的内容可以获知的且有动机将其用于该用途，且具体的延长效果是通过常规实验可以测定的；再次，对比文件2（参见说明书第34页第3段至第35页第2段）还公开了基于体重的给药用量，以及注射给药或肠胃外给药，基于此，本领域技术人员可以常规选择组合物中的有效量以及其他常规给药途径。最后，从属权利要求的附加技术特征或者被对比文件2公开，或者属于本领域常规实验手段或常规选择，或者对制药用途没有限定作用。因此，在其引用的权利要求不具备创造性的基础上，权利要求73-88不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。
6、权利要求89-93请求保护制备嵌合蛋白的方法，权利要求94请求保护嵌合蛋白的构建方法，然而，（1）将编码相应嵌合蛋白的多核苷酸或多核苷酸组，构建成载体或载体组，转染至一种或宿主细胞，以及在宿主细胞中表达相应的嵌合蛋白是本领域的常用手段；（2）基于利用加工酶的已知功能目的，将其引入载体也是本领域的常规技术手段，具体的加工酶是本领域的常规选择；（3）基于对比文件2对vWF功能片段的描述，本领域技术人员可以常规选择使用加工酶切割D1D2结构域，或者用D1D2结构域转染宿主细胞；（4）利用分选酶将异源蛋白连接在一起是本领域已知的常规手段。因此，在其引用的权利要求不具备创造性的基础上，权利要求89-94不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。
（三）对复审请求人相关意见的评述
对此，合议组认为：（1）首先，对比文件2揭示了FVIII和VWF-Fc在体内会发生解离的技术问题，并提出了通过增加浓度以促进其再结合的解决方案，但本领域技术人员知晓，面对同一技术问题时，可能存在多种解决方案，因此，对比文件2公开的解决方案并不构成对本领域技术人员寻找其他方案的技术障碍或反向教导；其次，对于需要同时使用的两种蛋白分子使用柔性肽、Fc区、化学合成的连接基等方式将其连接成一体，是本领域技术人员参考本领域常见的融合蛋白、双抗、ADC药物等技术方案能够想到的技术手段；且对于易解离的两分子通过增加浓度促进其再结合，或者通过将两者连接在一起增加空间上的接触机会以促进其再结合，均是本领域技术人员基于本领域的普通技术知识能够想到的技术方案。因此，在对比文件2公开了非共价结合存在易解离的技术问题时，本领域技术人员基于本领域的普通技术知识能够想到采用将两分子固定在一起的共价结合的方式以减少解离或促进其再结合，其相应的效果是本领域技术人员能够合理预期的，没有证据表明请求保护的技术方案能够具有预料不到的技术效果。（2）在对比文件2的启示下，出于延长半衰期或构建FVIII-Fc融合蛋白以利用Fc片段的二硫键将其与vWF-Fc融合蛋白相互连接的目的，本领域技术人员有动机任选地在人FVIII蛋白连接Fc片段。因此，复审请求人的意见陈述不具有说服力，不能被接受。
基于以上事实和理由，本案合议组作出如下审查决定。
三、决定
维持国家知识产权局于2017年11 月24 日对本申请作出的驳回决定。
如对本复审请求审查决定不服,根据专利法第41条第2款的规定,复审请求人可自收到本决定之日起三个月内向北京知识产权法院起诉。
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