发明创造名称：在线工业鲁棒化调控细胞状态生产抗IgE单抗的装置与方法
外观设计名称：
决定号：184340
决定日：2019-07-22
委内编号：1F253891
优先权日：
申请（专利）号：201410052548.0
申请日：2014-02-17
复审请求人：上海泰因生物技术有限公司
无效请求人：
授权公告日：
审定公告日：
专利权人：
主审员：杨莹跃
合议组组长：李金光
参审员：王亦然
国际分类号：C12M1/36，C12M1/34，C12Q3/00，C12P21/08
外观设计分类号：
法律依据：专利法第22条第3款
决定要点：如果发明的技术方案是本领域的技术人员在现有技术的基础上仅仅通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验就可以得到的，或者采用了一种替代的技术手段，而基于本领域技术人员的能力和所知晓的普通技术知识可知该技术手段属于本领域的公知常识，且结合现有技术本领域技术人员能够合理预期采用上述技术手段所实现的技术效果，则发明的技术方案对于本领域技术人员而言是显而易见的，不具备突出的实质性特点。
全文：
本复审请求涉及申请号为201410052548.0，名称为“在线工业鲁棒化调控细胞状态生产抗IgE单抗的装置与方法”的发明专利申请。申请人为上海泰因生物技术有限公司。本申请的申请日为2014年02月17日，公开日为2015年08月19日。
经实质审查，国家知识产权局原审查部门于2017年12月04日发出驳回决定，以权利要求1-12不符合专利法第22条第3款的规定为由驳回了本申请。驳回决定所依据的文本为：申请日提交的说明书摘要、说明书第1-88段、摘要附图、说明书附图1-3和5，2014年05月23日提交的说明书附图4以及2017年05月15日提交的权利要求第1-12项。
驳回决定所针对的权利要求书如下：
“1. 一种在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的装置，用以趋向性调节和控制细胞状态，其特征在于，该装置至少包括：培养液储存罐、可监控细胞生物反应器、产品收获罐、若干理生化指标检测器、在线监控系统、细胞状态调节控制装置及联动系统、细胞截留装置、若干流体无菌控速推动器和若干可控速管道体系，其中，所述培养液储存罐通过所述可控速管道体系经所述流体无菌控速推动器与所述可监控细胞生物反应器连接，所述细胞截留装置连接所述可监控细胞生物反应器，所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过所述可控速管道体系经所述流体无菌控速推动器选择性与所述可监控细胞生物反应器或所述细胞截留装置连接，所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过所述可控速管道体系经所述流体无菌控速推动器连接所述产品收获罐，所述可监控细胞生物反应器通过所述理生化指标检测器连接所述在线监控系统，所述在线监控系统与所述流体无菌控速推动器连接并发送控速指令给所述流体无菌控速推动器，上述所有容器类装置均通过可控速管道体系进行连接，其中，所述细胞状态调节控制装置及联动系统用于所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控；其中，所述细胞截留装置包括浓缩细胞出口和收获细胞出口，所述细胞状态调节控制装置及联动系统可择一与所述可监控细胞生物反应器的罐体、所述细胞截留装置的浓缩细胞出口或所述细胞截留装置的收获细胞出口相连通，所述细胞状态调节控制装置及联动系统至少包括三种工作联动方式：
第一种，当所述细胞状态调节控制装置及联动系统与所述细胞截留装置的浓缩细胞出口相连接时，其可将所述细胞截留装置中浓缩的细胞通过细胞截留装置上的排废细胞口排出，以达到所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控，并将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态；
第二种，当所述细胞状态调节控制装置及联动系统与所述可监控细胞生物反应器的罐体直接相连接时，其可将所述可监控细胞生物反应器内的细胞通过所述可监控细胞生物反应器上的排废口排出，以达到所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控，并将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态；
第三种，当所述细胞状态调节控制装置及联动系统与所述细胞截留装置的收获细胞出口相连接时，其可在所述细胞截留装置的不同截留效率态时将不同浓度的细胞通过作为排废细胞口的细胞截留装置的收获细胞出口排出，以达到所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控，并将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态；
其中，表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态至少包括：细胞周期G0/G1期细胞占25%～85%，S期细胞占25%～70%，G2/M期细胞占5%～40%且其总和为100%，细胞在G0/G1期平均停留时间3小时～80小时，S期平均停留时间3小时～40小时，G2/M期平均停留时间4小时～20小时。
2. 如权利要求1所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的装置，其特征在于，所述细胞状态调节控制装置及联动系统包括细胞分离回流单元和细胞排出单元及细胞状态的调控系统，所述细胞分离回流单元位于所述细胞截留装置上，其可通过流体无菌控速推动器控制细胞回流速度；所述细胞排出单元选择性位于所述细胞截留装置的浓缩细胞出口、收获细胞出口或所述可监控细胞生物反应器的细胞排出口上；所述细胞状态的调控系统将所述在线监控系统的设定值反馈至所述细胞排出单元的无菌管道控速器，控制细胞排出的速度与排出的细胞量，当排出的细胞量达到所述细胞状态的调控系统给出的排出细胞量后，流体无菌控速推动器停止工作。
3. 一种在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，包含以下步骤：
1)对细胞培养系统进行灭菌，然后向细胞培养系统内通入无菌的PBS缓冲液或无菌培养液，循环清洗整个细胞培养系统；
2)向细胞培养装置中接种细胞悬液，进行细胞的初级培养；
3)当细胞生长扩增到适合表达重组蛋白的细胞密度1～100×106个细胞/ml和细胞活力70%以上时，根据培养细胞的生长特性、细胞培养装置的工作体积和在线监控系统检测的细胞培养装置中理生化指标数据设定在线监控系统的各项参数，所述在线监控系统对灌注培养抗IgE单克隆抗体表达过程进行自动控制，将细胞培养装置中的各项指标维持在设定的最佳理生化条件，并调节细胞状态调节控制装置及联动系统的相应的流体无菌控速推动器，将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态，使整个系统达到稳态的指标，同时自动监控和记录整个细胞培养和抗IgE单克隆抗体表达过程；所述的步骤3）中，在线监控系统对灌注培养抗IgE单克隆抗体表达过程进行自动控制包括：在线监控系统接收理生化指标数据并处理，然后发出指令自动调节新鲜预处理培养液的添加速度和废细胞排出速度，维持细胞培养环境的理生化指标为设定的最佳理生化条件，其中，新鲜预处理培养液的添加速度是细胞截留装置上出液口的排出速度与排废细胞口流速之和；其中，表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态至少包括：细胞周期G0/G1期细胞占25%～85%，S期细胞占25%～70%，G2/M期细胞占5%～40%且其总和为100%，细胞在G0/G1期平均停留时间3小时～80小时，S期平均停留时间3小时～40小时，G2/M期平均停留时间4小时～20小时；
4)生产完成后，停止培养，产物回收纯化。
4. 根据权利要求3所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，所述的步骤2）中，接种细胞悬液的接种密度为0.5～5×106个细胞/ml。
5. 根据权利要求3所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，所述的步骤3）中，所述理生化指标数据包括细胞代谢、细胞生长速率、产物合成平衡调控数据，该些数据通过在线监测葡萄糖、乳酸、谷氨酸、谷氨酞胺、耗氧速率以及pH值指标获得，同时监测细胞比生长速率和蛋白比生成速率。
6. 根据权利要求3或5所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，所述的步骤3）中，检测细胞培养装置中的理生化指标数据的方法为：使细胞培养装置中的培养液没过理生化指标检测器组进行检测，并将理生化指标检测器检测和转换后的信号数据返回给在线监控系统。
7. 根据权利要求6所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，所述的步骤3）中，理生化指标检测器组可以检测的指标至少包括：温度，PH值，溶氧，溶二氧化碳，葡萄糖，乳酸，细胞密度，氨指标。
8. 根据权利要求3所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，所述的步骤3）中，所述最佳理生化条件至少包括：培养液添加10%-20% 的血清 (v/v)，若使用无血清培养液，则不添加血清；培养液温度34.5°C ± 5.5°C，PH值 7.0 ± 2.0，溶氧10%～65%，溶二氧化碳5% ± 8%。
9. 根据权利要求3所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，所述的步骤3）中，在线监控系统调节控制的细胞状态指标至少包括：细胞比生长速率，细胞周期分布，细胞周期平均停留时间。
10. 根据权利要求3所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，所述的步骤3）中，所述整个系统的稳态的指标主要是指乳酸生成速率，葡萄糖消耗速率比值，细胞比生长速率的值保持基本稳定。
11. 根据权利要求3所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，所述的步骤3）中，自动监控和记录整个细胞培养和重组蛋白表达过程为：设定在线监控系统自动记录每个指标探头监测数据和设备运行参数，自动记录的时间间隔为5～300秒，并存储数据。
12. 根据权利要求3所述的在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，所述的步骤4）中，判断生产完成的标准为：细胞活率下降，或细胞总数下降明显，或蛋白表达明显降低。”
驳回决定认为，权利要求1与对比文件1（US5166067A，公开日为1992年11月24日）的区别在于权利要求1中培养液储存罐连接到生物反应器，而对比文件1是连接到细胞截留罐；权利要求1中反应器还通过理生化检测器连接到在线监控系统，而对比文件1没有特别声明；细胞状态调节装置以及联动系统选择性地与可监控细胞生物反应器或细胞截留装置连接且用于生物反应器内细胞比生长速率、不同细胞状态的调控，具体限定了细胞状态调节控制装置及联动系统的三种工作联动方式是通过不同排废口来控制实施。对于上述区别，本领域技术人员容易想到将对比文件1的培养基罐连接到生物反应器。对比文件1给出了对反应器常规参数进行监控的启示，本领域技术人员因此容易想到对细胞的状态进行调控。本领域技术人员也可以根据需要选择连接的位置。至于使用排废口作为控制装置，对比文件2（CN103305417A，公开日为2013年09月18日）给出了在细胞灌流截流培养过程中，可以通过排出一部分细胞的方法保证细胞的存活率最终保证高活性的细胞生长密度的技术教导，而相关构件进行管路组装是常规技术手段，因此权利要求1不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。权利要求3与对比文件1相比的区别在于权利要求3限定用于生产抗IgE单克隆抗体，并且用无菌PBS缓冲液清洗系统，生产完成后停止培养再进行产物回收纯化，而对比文件1是培养过程中就进行产物回收纯化；权利要求3还限定了细胞扩增密度和活力具体数值；权利要求3对在线监控系统对灌注培养抗IgE单克隆抗体表达过程的自动控制进行以及表达单克隆抗体的最适宜细胞状态进行限定。上述区别技术特征是本领域技术人员容易想到的，因此权利要求3也不符合专利法第22条第3款的规定。权利要求2、4-12的附加技术特征或被对比文件公开，或是本领域常规技术手段，因此也不符合专利法第22条第3款的规定。
申请人（下称复审请求人）对上述驳回决定不服，于2018年03月15日向国家知识产权局提出了复审请求，同时提交了修改的权利要求书全文替换页（共4页12项），所作修改为将原权利要求3作为新的权利要求1，并在新权利要求1的步骤（3）后加入技术特征“所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过可控速管道体系经流体无菌控速推动器选择性与所述细胞培养装置或所述细胞截留装置连接，用于所述细胞培养装置内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控”，将原权利要求3的从权4-12作为新权利要求1的从权2-10；原权利要求1及其从权2修改为新权利要求11及其从权12。
复审请求时新修改的独立权利要求1和11如下：
“1. 一种在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，包含以下步骤：
1)对细胞培养系统进行灭菌，然后向细胞培养系统内通入无菌的PBS缓冲液或无菌培养液，循环清洗整个细胞培养系统；
2)向细胞培养装置中接种细胞悬液，进行细胞的初级培养；
3)当细胞生长扩增到适合表达重组蛋白的细胞密度1～100×106个细胞/ml和细胞活力70％以上时，根据培养细胞的生长特性、细胞培养装置的工作体积和在线监控系统检测的细胞培养装置中理生化指标数据设定在线监控系统的各项参数，所述在线监控系统对灌注培养抗IgE单克隆抗体表达过程进行自动控制，将细胞培养装置中的各项指标维持在设定的最佳理生化条件，并调节细胞状态调节控制装置及联动系统的相应的流体无菌控速推动器，将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态，使整个系统达到稳态的指标，同时自动监控和记录整个细胞培养和抗IgE单克隆抗体表达过程；所述的步骤3)中，在线监控系统对灌注培养抗IgE单克隆抗体表达过程进行自动控制包括：在线监控系统接收理生化指标数据并处理，然后发出指令自动调节新鲜预处理培养液的添加速度和废细胞排出速度，维持细胞培养环境的理生化指标为设定的最佳理生化条件，其中，新鲜预处理培养液的添加速度是细胞截留装置上出液口的排出速度与排废细胞口流速之和；其中，表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态至少包括：细胞周期G0/G1期细胞占25％～85％，S期细胞占25％～70％，G2/M期细胞占5％～40％且其总和为100％，细胞在G0/G1期平均停留时间3小时～80小时，S期平均停留时间3小时～40小时，G2/M期平均停留时间4小时～20小时；所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过可控速管道体系经流体无菌控速推动器选择性与所述细胞培养装置或所述细胞截留装置连接，用于所述细胞培养装置内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控；
4)生产完成后，停止培养，产物回收纯化。”
“11. 一种在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的装置，用于实施权利要求1-10中任一所述的方法，用以趋向性调节和控制细胞状态，其特征在于，该装置至少包括：培养液储存罐、可监控细胞生物反应器、产品收获罐、若干理生化指标检测器、在线监控系统、细胞状态调节控制装置及联动系统、细胞截留装置、若干流体无菌控速推动器和若干可控速管道体系，其中，所述培养液储存罐通过所述可控速管道体系经所述流体无菌控速推动器与所述可监控细胞生物反应器连接，所述细胞截留装置连接所述可监控细胞生物反应器，所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过所述可控速管道体系经所述流体无菌控速 推动器选择性与所述可监控细胞生物反应器或所述细胞截留装置连接，所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过所述可控速管道体系经所述流体无菌控速推动器连接所述产品收获罐，所述可监控细胞生物反应器通过所述理生化指标检测器连接所述在线监控系统，所述在线监控系统与所述流体无菌控速推动器连接并发送控速指令给所述流体无菌控速推动器，上述所有容器类装置均通过可控速管道体系进行连接，其中，所述细胞状态调节控制装置及联动系统用于所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控；其中，所述细胞截留装置包括浓缩细胞出口和收获细胞出口，所述细胞状态调节控制装置及联动系统可择一与所述可监控细胞生物反应器的罐体、所述细胞截留装置的浓缩细胞出口或所述细胞截留装置的收获细胞出口相连通，所述细胞状态调节控制装置及联动系统至少包括三种工作联动方式：
第一种，当所述细胞状态调节控制装置及联动系统与所述细胞截留装置的浓缩细胞出口相连接时，其可将所述细胞截留装置中浓缩的细胞通过细胞截留装置上的排废细胞口排出，以达到所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控，并将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态；
第二种，当所述细胞状态调节控制装置及联动系统与所述可监控细胞生物反应器的罐体直接相连接时，其可将所述可监控细胞生物反应器内的细胞通过所述可监控细胞生物反应器上的排废口排出，以达到所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控，并将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态；
第三种，当所述细胞状态调节控制装置及联动系统与所述细胞截留装置的收获细胞出口相连接时，其可在所述细胞截留装置的不同截留效率态时将不同浓度的细胞通过作为排废细胞口的细胞截留装置的收获细胞出口排出，以达到所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控，并将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态；
其中，表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态至少包括：细胞周期G0/G1期细胞占25％～85％，S期细胞占25％～70％，G2/M期细胞占5％～40％且其总和为100％，细胞在G0/G1期平均停留时间3小时～80小时，S期平均停留时间3小时～40小时，G2/M期平均停留时间4小时～20小时。”
复审请求人在意见陈述书中记载了不同细胞排出速度下细胞周期分布和表达量情况、非稳定细胞株瞬时转染灌注培养条件下细胞排出速度对于细胞周期分布的影响等实验数据，并认为：（1）与对比文件1相比，权利要求1的区别技术特征至少包括：步骤（3）中，在线监控系统接收理生化指标数据并处理，然后发出指令自动调节新鲜预处理培养液的添加速度和废细胞排出速度，维持细胞培养环境的理生化指标为设定的最佳理生化条件。该区别特征是通过调节培养液的添加速度和废细胞排出速度，尤其是废细胞的排出速度，将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体最适宜细胞状态，包括最适宜的细胞比生长速率和最适宜的细胞周期分布，建立了废细胞排出速度与细胞比生长速率和细胞周期分布之间的相互关系。所以本发明的核心在于通过调节排出细胞速度的方式调节细胞状态，使其具体为该条件下的一个细胞周期分布，不同的细胞排出速度对应不同的细胞周期，通过选择不同的细胞排出速度，能特定的改变细胞周期，从而影响到细胞的比生长速率及表达量。其技术效果在于：通过调节并选择特定的细胞排出速率，调控至特定细胞周期以达到高效表达状态，使处于不同细胞周期的细胞的相对数量发生变化，更多比例的细胞更长时间的维持在高效表达蛋白的细胞周期，进而通过调节细胞排出速率实现对细胞周期的调控进而实现了在很长的培养时间内细胞表达量一直维持在较高水平，最终实现了收获更多蛋白的目的。（2）对比文件2排出细胞的目的是把代谢废细胞和对细胞生长有害的物质排出，达到细胞长期保持高存活率，同时使细胞密度增长到一个很高的水平，不是调控细胞比生长速率和细胞周期分布，也不是通过细胞密度控制实现对细胞状态调控，不能给出本发明通过调节细胞排出速度调控细胞状态特别是细胞周期分布的技术启示。
经形式审查合格，国家知识产权局于2018年06月20日依法受理了该复审请求，并将其转送至原审查部门进行前置审查。
原审查部门在前置审查意见书中认为本申请仍存在不具备创造性的缺陷，因而坚持原驳回决定。
随后，国家知识产权局成立合议组对本案进行审理。
合议组于2019年04月30日向复审请求人发出复审通知书，指出权利要求1-12仍不符合专利法第22条第3款的规定。复审请求人于2019年06月14日提交了意见陈述书及记载了实验数据的附件1（内容同提复审请求时在意见陈述书中记载的实验数据），但未修改申请文件。
复审请求人认为：本申请建立了废细胞排出速度与培养体系的细胞周期分布之间的关系，通过实时选择合适的废细胞排出速度，使更多比例的细胞更长时间地维持在高效表达蛋白的细胞周期。现有技术并未关注和研究细胞的排出速度，没有启示实时自动调节排出速度，本领域技术人员缺乏调节细胞排出速度的动机。
在上述程序的基础上，合议组认为本案事实已经清楚，可以作出审查决定。
二、决定的理由
1、审查文本的认定
复审请求人在提出复审请求时提交了修改的权利要求书全文替换页（共4页12项），经审查，其修改符合专利法第33条和实施细则第61条第1款的规定，因此，本复审决定针对的文本为：申请日2014年02月17日提交的说明书第1-88段、说明书摘要、摘要附图、说明书附图图1-3、图5，2014年05月23日提交的说明书附图图4以及2018年03月15日提交的权利要求第1-12项。
2、关于专利法第22条第3款
专利法第22条第3款规定，创造性，是指与现有技术相比，该发明具有突出的实质性特点和显著的进步。
如果发明的技术方案是本领域的技术人员在现有技术的基础上仅仅通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验就可以得到的，或者采用了一种替代的技术手段，而基于本领域技术人员的能力和所知晓的普通技术知识可知该技术手段属于本领域的公知常识，且结合现有技术本领域技术人员能够合理预期采用上述技术手段所实现的技术效果，则发明的技术方案对于本领域技术人员而言是显而易见的，不具备突出的实质性特点。
（1）关于权利要求1-10
本申请权利要求1请求保护一种在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的方法，其特征在于，包含以下步骤：
1)对细胞培养系统进行灭菌，然后向细胞培养系统内通入无菌的PBS缓冲液或无菌培养液，循环清洗整个细胞培养系统；
2)向细胞培养装置中接种细胞悬液，进行细胞的初级培养；
3)当细胞生长扩增到适合表达重组蛋白的细胞密度1～100×106个细胞/ml和细胞活力70％以上时，根据培养细胞的生长特性、细胞培养装置的工作体积和在线监控系统检测的细胞培养装置中理生化指标数据设定在线监控系统的各项参数，所述在线监控系统对灌注培养抗IgE单克隆抗体表达过程进行自动控制，将细胞培养装置中的各项指标维持在设定的最佳理生化条件，并调节细胞状态调节控制装置及联动系统的相应的流体无菌控速推动器，将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态，使整个系统达到稳态的指标，同时自动监控和记录整个细胞培养和抗IgE单克隆抗体表达过程；所述的步骤3)中，在线监控系统对灌注培养抗IgE单克隆抗体表达过程进行自动控制包括：在线监控系统接收理生化指标数据并处理，然后发出指令自动调节新鲜预处理培养液的添加速度和废细胞排出速度，维持细胞培养环境的理生化指标为设定的最佳理生化条件，其中，新鲜预处理培养液的添加速度是细胞截留装置上出液口的排出速度与排废细胞口流速之和；其中，表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态至少包括：细胞周期G0/G1期细胞占25％～85％，S期细胞占25％～70％，G2/M期细胞占5％～40％且其总和为100％，细胞在G0/G1期平均停留时间3小时～80小时，S期平均停留时间3小时～40小时，G2/M期平均停留时间4小时～20小时；所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过可控速管道体系经流体无菌控速推动器选择性与所述细胞培养装置或所述细胞截留装置连接，用于所述细胞培养装置内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控；
4)生产完成后，停止培养，产物回收纯化。
根据本申请说明书中记载的效果可知，本发明的目的在于，针对目前单克隆抗体传统制备工艺中的上述缺点，提供一种既可在线、连续、监控细胞培养环境中多种理生化指标，又可以直接调节和控制细胞状态（包括细胞周期等）的生物反应器类细胞培养装置及由该装置生产抗IgE单克隆抗体的方法，使其降低染菌风险，维持细胞生长环境稳定，保持细胞恒定生长活力，达到高质、高效连续生产抗IgE单克隆抗体的目的（参见说明书第0013段）。
对比文件1公开了细胞培养的方法、系统和装置，该方法、系统和装置能消除对生物细胞的损害且无细胞对培养基污染，能长时间高密度培养（参见说明书记载的发明目的部分）。实施例1给出了采用附图1所示培养系统对动物细胞进行灌注培养的方法，具体为：在培养之前，给系统中的各罐体和管线通入蒸汽加热灭菌，在无菌条件下将培养基通入培养液罐11；将细胞生长扩增至浓度l×106个细胞／m1，作为种子细胞悬液；由液体输送分配管路24、25、26、29连接膜过滤装置6、培养装置1、培养液罐11、滤液收集罐13，装配在各个液体输送分配管线中的阀和液体输送泵与程序处理器10连接。该培养装置是不锈钢制的且有效容积为5L，可自动控制温度、pH、DO（溶氧浓度）和搅拌器3，采用覆盖法由压缩机4把经空气过滤器5后通过空气输送分配管路28的氧气供应到培养装置中的液体表面。在无菌条件下将4.5L培养基输入下述蒸汽处理过的培养装置后，将上述种子细胞悬液0.5L接种到培养基上，调整细胞浓度为4.1×105个细胞/m1；在把无菌空气吹到液体表面的同时，自动控制搅拌速度、温度、pH和培养液中溶解的氧浓度（DO）；培养过程中控制搅拌速度为20r.p.m、温度37℃、pH为7．0-7．6，DO为1PPm。打开阀20且操作泵16，把1升培养液肉汁引入至膜过滤装置6中。通过液体输送分配管路25将膜过滤装置6与培养液罐11连接，通过液体输送分配管路26将膜过滤装置6与滤液收集罐13连接。为了将过滤后的悬浮细胞返回且流回到培养装置1中，将液体输送分配管路29布置在膜过滤装置6的底部。由泵17作用通过液体输送分配管路29将将膜过滤装置6中产生的悬浮细胞返回到培养装置1中。从附图1中可以看出，程序处理器10控制着系统的各种阀和泵，由程序处理器10对连接的各个阀和泵进行控制从而控制流速。从表1可以看出实施例1培养细胞不同天数细胞密度为4.1×105个细胞/m1至75×105个细胞/m1，相应细胞存活率维持在90%至92%之间（参见说明书实施例1、附图1和表1），说明上述限定条件是比较适宜所培养细胞生长的条件和细胞密度。通过组件的作用可以看出，对比文件1中自动控制搅拌速度、温度、pH和DO体现出具有在线监控系统，对比文件1中公开的处理器10控制着系统的各种阀和泵，即相当于基于监控系统进行相应调节的控制装置和联动装置，对比文件1中公开的膜过滤装置6、阀和液体输送泵分别执行了所述细胞截留装置的截留操作以及控速推动器的输送操作；对比文件1中的细胞存活率很高说明其培养维持在最佳理生化条件下，表明对比文件1的方法也是根据培养细胞的生长特性、细胞培养装置的工作体积和在线监控系统检测的细胞培养装置中理生化指标数据设定在线监控系统的各项参数。所以，权利要求1相对于对比文件1的区别技术特征在于权利要求1中限定了：（1）用于生产抗IgE单克隆抗体，且停止培养后再相应进行产物回收纯化。(2)用无菌PBS缓冲液清洗系统。(3)限定了当细胞生长扩增到适合表达重组蛋白的细胞密度1～100×106个细胞/ml和细胞活力70％以上时，根据理生化指标设定各项参数，调节细胞状态调节控制装置及联动系统将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态，所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过可控速管道体系经流体无菌控速推动器选择性与所述细胞培养装置或所述细胞截留装置连接，用于所述细胞培养装置内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控；维持细胞培养环境的理生化指标为设定的最佳理生化条件是通过自动调节新鲜预处理培养液的添加速度和废细胞排出速度实现的，所述最佳理生化条件中，新鲜预处理培养液的添加速度是细胞截留装置上出液口的排出速度与排废细胞口流速之和；其中，表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态至少包括：细胞周期G0/G1期细胞占25％～85％，S期细胞占25％～70％，G2/M期细胞占5％～40％且其总和为100％，细胞在G0/G1期平均停留时间3小时～80小时，S期平均停留时间3小时～40小时，G2/M期平均停留时间4小时～20小时。基于上述区别技术特征可以确认，权利要求1相对于对比文件1实际解决的技术问题是提供生产抗IgE单克隆抗体的方法。
对于本领域技术人员而言，在解决上述技术问题时会了解现有技术中常规生产抗IgE单克隆抗体的手段。针对上述区别技术特征（1），本领域公知单克隆抗体通常使用连续式流加或灌注等方式对杂交瘤细胞进行大规模培养的方法生产（参见公知常识《动物细胞工程》，刘玉堂主编，哈尔滨东北林业大学出版社，2003年12月，第179页有关连续式培养部分），抗IgE单克隆抗体是具有商业价值的已知化合物，通常使用细胞工程培养细胞获得这种化合物，所以，本领域技术人员容易想到常规生产方式，即采用培养细胞方法来生产抗IgE单克隆抗体。本领域在采用细胞培养来生产产物时常规收获产物的方式之一就是培养完成后对产物进行回收纯化，所以，本领域技术人员在进行细胞培养生产产物时显而易见可想到采用常规方式在生产完成后停止培养，再进行产物回收纯化。针对区别技术特征（2），本领域公知无菌PBS（磷酸缓冲液）是本领域常见的成份已知的缓冲液，且常规用于配制溶液以及清洗培养器具等，所以，在进行细胞培养时本领域技术人员采用上述磷酸缓冲液来清洗培养所用器具是显而易见的。上述区别技术特征（3）的实质是通过细胞状态调节控制装置控制培养液添加与废细胞排出速度，使具有一定活力的细胞处于最适宜细胞状态。首先，关于细胞培养中通过细胞状态调节控制装置进行的相应培养液添加与废细胞排出操作，本领域公知细胞培养的操作方式包括灌注培养、连续式培养和分批培养等工艺，其中连续式培养是指将种子细胞和培养液一起加入反应器进行培养，而且在培养过程中，一方面不断将新鲜培养液加入反应器，另一方面又将培养液连续不断排出，这样可以控制细胞所处环境条件长时间的稳定，而且连续式培养的细胞随培养液一起从反应器中流出（参见上述公知常识《动物细胞工程》第178-179页第8.2.2细胞培养的操作方式），相当于在培养过程中不断排出废细胞。由此可知，本领域技术人员通过公知常识即可想到将废细胞排出操作引入细胞培养方法中，将排出废细胞的具体操作安排在细胞培养或截留步骤中也是根据培养流程通过合理分析可以得到的。所以，通过细胞状态调节控制装置来实现具体排出操作是本领域培养细胞过程中的常规操作方式，新鲜预处理培养液的添加速度和废细胞排出速度等均是本领域可以常规调节并确定的参数，根据连续式培养法工艺流程，本领域技术人员易于想到新鲜预处理培养液的添加速度是细胞截留装置上出液口的排出速度与排废细胞口流速之和。其次，关于细胞培养中最适宜细胞状态，本领域公知细胞培养中细胞密度、活力、状态与表达重组蛋白或生长因子能力密切相关，要想表达获得一定量的蛋白或生长因子，必须使细胞浓度、活力和状态达到理想状态，维持细胞培养环境的理生化指标达到设定的最佳条件是本领域的一贯目标，因此本领域技术人员有动机且有能力通过有限的常规试验确定细胞浓度、活力、状态和表达蛋白或生长因子能力的相关性，具体的细胞周期分布可由本领域技术人员根据常规技术手段（例如流式细胞仪）测量获得。此外，对比文件2公开了进行蛋白生产的高产量反应器，包括生物反应器及其连接的ATF灌流设备，若在细胞扩增过程中，某一时段出现存活率下降的情况，则立即扩大生长培养基交换体积，或每24小时排出部分培养细胞（10-50％），并用生长培养基补齐要求培养体积的方式补救（参见说明书第0012至0021段）。上述公开内容教导本领域技术人员在细胞灌流截流培养过程中，可以通过排出一部分细胞的方法保证细胞的存活率最终保证高活性的密度；在此基础上，本领域技术人员容易想到在截留装置的适当的位置额外增加浓缩细胞出口以便于及时排出细胞，保持培养状态中细胞活力，有利于生产所需的蛋白。而且上述区别技术特征（1）至（3）在以细胞培养生产蛋白中所起的作用是本领域技术人员可以合理预期的。所以，相对于对比文件1结合本领域的公知常识或者对比文件1结合对比文件2和本领域的公知常识，本申请权利要求1的技术方案不具有突出的实质性特点和显著的进步，不符合专利法第22条第3款的规定。
引用权利要求1的权利要求2进一步限定步骤2）中接种细胞悬浮液的接种密度为0.5～5×106个细胞／m1。对比文件2已经公开了应用细胞培养方式生产蛋白的接种细胞密度可以为0.3×106～1×106个细胞/m1(参见对比文件2说明书第0058段)，在此基础上选择获得权利要求2中的具体数值对于本领域技术人员是常规选择，因此权利要求2不具备专利法22条第3款规定的创造性。
引用权利要求1的权利要求3进一步限定所述的步骤3)中，所述理生化指标数据包括细胞代谢、细胞生长速率、产物合成平衡调控数据，该些数据通过在线监测葡萄糖、乳酸、谷氨酸、谷氨酞胺、耗氧速率以及pH值指标获得，同时监测细胞比生长速率和蛋白比生成速率。 对比文件2公开的应用细胞培养进行蛋白生产中接种后每24小时取样检测细胞数与生化指标，其中该生化指标包括pH、O2溶解分压、CO2溶解分压、谷氨酰胺含量、谷氨酸含量、葡萄糖含量、乳酸含量等（参见说明书第0058-0059段），而且，通过乳酸、葡萄糖的监控，和细胞活率、总数、蛋白表达的监控判断与控制细胞状态已经是本领域常规的技术（参见公知常识《现代生物学实验技术指导》， 向本琼等主编，第274-276页，第八章细胞研究技术8．1．3．6动物细胞的灌注培养方法，2009年12月31日）。此外，细胞代谢、细胞生长速率、产物合成平衡调控数据、比生长速率和蛋白比生成速率是评价细胞培养进行蛋白生产中常用的指标，本领域技术人员容易想到使用常用指标进行监测。所以，权利要求3不具备专利法22条第3款规定的创造性。
引用权利要求1或3的权利要求4进一步限定所述的步骤3)中，检测细胞培养装置中的理生化指标数据的方法为：使细胞培养装置中的培养液没过理生化指标检测器组进行检测，并将理生化指标检测器检测和转换后的信号数据返回给在线监控系统。检测器放入检测介质中进行检测，并将其检测结果转化为信号数据传给监控系统是常规监控系统采用的方式，本领域技术人员容易想到利用常规监控手段进行细胞培养监控。权利要求4不具备专利法22条第3款规定的创造性。
引用权利要求4的权利要求5进一步限定所述的步骤3)中，理生化指标检测器组可以检测的指标至少包括：温度，pH值，溶氧，溶二氧化碳，葡萄糖，乳酸，细胞密度，氨指标。这些检测指标均被对比文件2公开（参见上述针对权利要求3评述引用的部分），在对比文件2已教导的情况下，本领域技术人员容易想到采用这些检测指标。权利要求5不具备专利法22条第3款规定的创造性。
引用权利要求1的权利要求6进一步限定所述的步骤3)中，所述最佳理生化条件至少包括：培养液添加10％-20％的血清(v/v)，若使用无血清培养液，则不添加血清；培养液温度34.5℃±5.5℃，PH值7.0±2.0，溶氧10％～65％，溶二氧化碳5％±8％。这些指标是培养细胞生产蛋白需要考虑指标，可由本领域技术人员通过常规试验确认获得，可见，权利要求6也不具备专利法第22条第3款的规定。
引用权利要求1的权利要求7进一步限定所述的步骤3)中，在线监控系统调节控制的细胞状态指标至少包括：细胞比生长速率，细胞周期分布，细胞周期平均停留时间。引用权利要求1的权利要求8进一步限定所述的步骤3)中，所述整个系统的稳态的指标主要是指乳酸生成速率，葡萄糖消耗速率比值，细胞比生长速率的值保持基本稳定。引用权利要求1的权利要求9进一步限定所述的步骤3)中，自动监控和记录整个细胞培养和重组蛋白表达过程为：设定在线监控系统自动记录每个指标探头监测数据和设备运行参数，自动记录的时间间隔为5～300秒，并存储数据。引用权利要求1的权利要求10进一步限定所述的步骤4)中，判断生产完成的标准为：细胞活率下降，或细胞总数下降明显，或蛋白表达明显降低。这些附加技术特征所限定的指标也是细胞培养生产蛋白中常见的需要监控的指标，本领域技术人员可以根据需要合理添加，而且可以根据需要选择监控指标并通过有限试验获得细胞周期分布与停留时间等。所以权利要求7-10也不具备专利法22条第3款规定的创造性。
（2）关于权利要求11-12
权利要求11请求保护一种在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体的装置，用于实施权利要求1-10中任一所述的方法，以趋向性调节和控制细胞状态，其特征在于，该装置至少包括：培养液储存罐、可监控细胞生物反应器、产品收获罐、若干理生化指标检测器、在线监控系统、细胞状态调节控制装置及联动系统、细胞截留装置、若干流体无菌控速推动器和若干可控速管道体系，其中，所述培养液储存罐通过所述可控速管道体系经所述流体无菌控速推动器与所述可监控细胞生物反应器连接，所述细胞截留装置连接所述可监控细胞生物反应器，所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过所述可控速管道体系经所述流体无菌控速推动器选择性与所述可监控细胞生物反应器或所述细胞截留装置连接，所述细胞状态调节控制装置及联动系统通过所述可控速管道体系经所述流体无菌控速推动器连接所述产品收获罐，所述可监控细胞生物反应器通过所述理生化指标检测器连接所述在线监控系统，所述在线监控系统与所述流体无菌控速推动器连接并发送控速指令给所述流体无菌控速推动器，上述所有容器类装置均通过可控速管道体系进行连接，其中，所述细胞状态调节控制装置及联动系统用于所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控；其中，
所述细胞截留装置包括浓缩细胞出口和收获细胞出口，所述细胞状态调节控制装置及联动系统可择一与所述可监控细胞生物反应器的罐体、所述细胞截留装置的浓缩细胞出口或所述细胞截留装置的收获细胞出口相连通，所述细胞状态调节控制装置及联动系统至少包括三种工作联动方式：
第一种，当所述细胞状态调节控制装置及联动系统与所述细胞截留装置的浓缩细胞出口相连接时，其可将所述细胞截留装置中浓缩的细胞通过细胞截留装置上的排废细胞口排出，以达到所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控，并将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态；
第二种，当所述细胞状态调节控制装置及联动系统与所述可监控细胞生物反应器的罐体直接相连接时，其可将所述可监控细胞生物反应器内的细胞通过所述可监控细胞生物反应器上的排废口排出，以达到所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控，并将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态；
第三种，当所述细胞状态调节控制装置及联动系统与所述细胞截留装置的收获细胞出口相连接时，其可在所述细胞截留装置的不同截留效率态时将不同浓度的细胞通过作为排废细胞口的细胞截留装置的收获细胞出口排出，以达到所述可监控细胞生物反应器内不同细胞比生长速率及不同细胞状态的调控，并将细胞状态调节控制为表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态；
其中，表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态至少包括：细胞周期G0/G1期细胞占25％～85％，S期细胞占25％～70％，G2/M期细胞占5％～40％且其总和为100％，细胞在G0/G1期平均停留时间3小时～80小时，S期平均停留时间3小时～40小时，G2/M期平均停留时间4小时～20小时。
对比文件1公开的培养系统中包括：由肉质液体输送分配管路24、25、26、29连接上膜过滤装置6、培养装置1、培养液罐11、滤液收集罐13，装配在各个液体输送分配管路中的阀和液体输送泵与程序处理器10连接。该培养装置是不锈钢制的且有效容积为5L，可自动控制温度、pH、DO和搅拌器3，采用覆盖法由压缩机4把经空气过滤器5后通过空气输送分配管路28的氧气供应到培养装置中的液体表面；自动控制搅拌速度、温度、pH和DO（参见说明书实施例1）。通过液体输送分配管路26将膜过滤装置6与滤液收集罐13连接。为了将过滤后的悬浮细胞返回且流回到培养装置1中，将液体输送分配管路29布置在膜过滤装置6的底部。由泵17作用通过液体输送分配管路29将产生着的悬浮细胞返回到培养装置1中。由附图1可以看出，上述各个组件通过管路连接，在管路上设有泵16、17、18、19和阀20、21、22、30，膜过滤装置6通过输送管路24和回流管路29连接到培养装置 1，泵16、17和阀20、30分别位于从培养装置1到膜过滤装置6之间的管路24以及从膜过滤装置回到培养装置1之间的管路29上，泵18、19和阀21、22分别位于从培养液罐11到膜过滤装置 6的管路25以及从膜过滤装置 6到滤液收集罐13之间的管路26上。可见对比文件1中的膜过滤装置 6具有两个出口，一个是让滤液流向滤液收集罐13的收获滤液出口，另一个是让悬浮细胞随液体流向培养装置1的出口。对比文件1的装置可自动控制各项指标，说明其具有若干理生化指标检测器和在线监控系统。对比权利要求11限定的装置与对比文件1公开培养系统，对比文件1中的膜过滤装置6、培养装置1、培养液罐11、滤液收集罐13，液体输送分配管路、阀和液体输送泵以及处理器10分别相当于本申请权利要求11中的细胞截留装置、可监控细胞生物反应器、培养液储存罐、产品收获罐、若干可控速管道体系、若干流体无菌控速推动器、在线监控系统及联动系统。虽然权利要求11中还记载了在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体以及表达抗IgE单克隆抗体的最适宜细胞状态，但在线工业鲁棒化调节和控制细胞状态生产抗IgE单克隆抗体以及细胞表达产物及其最适宜细胞状态是装置控制方法或应用方法的技术特征，其对装置本身的组成和结构不会带来影响，因此没有实质性的限定作用。所以，权利要求11限定装置与对比文件1公开装置的区别技术特征在于：（1）权利要求11中培养液储存罐连接到生物反应器，培养液由储存罐直接引入培养装置；对比文件1的方案中培养液储存罐连接到过滤装置上，再由过滤装置排出引入培养装置。（2）权利要求11中限定了用于调控细胞比生长速率及细胞状态的细胞状态调节控制装置和联动系统以及三种可选择的工作联动方式，并相应地限定了具有浓缩细胞出口或排废细胞口；对比文件1的系统中没有排废细胞口，且对比文件1的方案中由处理器10控制各个液体输送管路中的阀和泵，从而调控培养装置和膜过滤装置中的细胞密度。依据上述区别技术特征和本申请说明书记载的效果可知，权利要求11相对于对比文件1实际解决的技术问题是提供了另一种细胞培养装置。
对于本领域技术人员而言，在解决上述技术问题时会了解现有技术中常用细胞培养装置及其监控方式。针对上述区别技术特征（1）：首先，将培养液由储存罐直接引入培养装置是本领域的常规连接方式。其次，虽然对比文件1的培养液是由培养液罐引入过滤装置后再进一步输送到培养液反应器中，但并没有改变为反应器提供培养液的功能，只是对比文件1因使用肉汁为培养液，在不需要对培养液进行过滤的情况下，本领域技术人员容易想到将培养液罐与反应器之间的连接方式进行常规连接。针对上述区别技术特征（2），参见对权利要求1的评述，本领域技术人员通过公知常识可想到将废细胞排出操作引入对比文件1的细胞培养方法和装置中，并且通过分析培养流程可知，细胞在整个培养过程中主要存在于反应器和细胞截留装置中，因此，可根据培养流程通过合理分析得到将排出废细胞的具体操作装置与细胞培养反应器或截留装置相连接的结论，在此基础上，为实现排出废细胞的效果而设置细胞状态调节控制装置及联动系统并设计相应至少三种联动方式则属于本领域的常规选择，且这种设置的效果是所属领域技术人员可以合理预期的。综上，权利要求11的技术方案不具有突出的实质性特点和显著的进步，不符合专利法第22条第3款的规定。
权利要求12引用权利要求11，进一步限定所述细胞状态调节控制装置及联动系统包括所述细胞状态调节控制装置及联动系统包括细胞分离回流单元和细胞排出单元及细胞状态的调控系统，所述细胞分离回流单元位于所述细胞截留装置上，其可通过流体无菌控速推动器控制细胞回流速度；所述细胞排出单元选择性位于所述细胞截留装置的浓缩细胞出口、收获细胞出口或所述可监控细胞生物反应器的细胞排出口上；所述细胞状态的调控系统将所述在线监控系统的设定值反馈至所述细胞排出单元的无菌管道控速器，控制细胞排出的速度与排出的细胞量，当排出的细胞量达到所述细胞状态的调控系统给出的排出细胞量后，流体无菌控速推动器停止工作。针对上述附加技术特征，对比文件1教导了通过处理器控制不同管路中泵和阀来控制液体流速和流量（参见对比文件1附图1），同时本领域技术人员了解本领域常见的反馈控制方式控制流速（参见公知常识《细胞工程》，陈志南主编，科学出版社，流加式操作，2005年08月，第248-249页）。排出细胞多少会影响反应器和截留装置中细胞密度，且本领域技术人员公知连续式培养可以排出细胞，对比文件2也教导了培养细胞过程中可以排出细胞，在此基础上，本领域技术人依据对排出管路的控制容易想到也需对位于所述细胞截留装置的浓缩细胞出口即排废细胞口进行监测和反馈控制。从而可以想到将所述细胞排出单元选择性位于所述细胞截留装置的浓缩细胞出口、收获细胞出口或所述可监控细胞生物反应器的细胞排出口上，同时，将所述在线监控系统的设定值反馈至所述细胞排出单元的无菌管道控速器，控制细胞排出的速度与排出的细胞量，当排出的细胞量达到所述细胞状态的调控系统给出的排出细胞量后，流体无菌控速推动器停止工作。因此，权利要求12也不具备专利法22条第3款的规定的创造性。
3、关于复审请求人的相关意见
对于复审请求人的相关意见，合议组认为：如复审请求人所述的本案涉及的技术核心在于通过调节废细胞排出速度调节细胞状态，达到特定的细胞周期分布。然而，细胞周期分布属于细胞状态的一种，当细胞密度变化时改变了细胞所处的环境自然会带来细胞周期比例分布的一定程度的变化，属于改变代谢产物分泌的微观层次的原因，而不是技术手段，本申请采用的技术手段只是将细胞适量排出以改进细胞密度及其环境。如前所述，本领域常规连续式培养方法中已存在排出细胞的方式，例如上述公知常识性证据中表明连续式培养的细胞随培养液一起从培养液中排出，可以控制细胞所处环境条件的稳定，对比文件2也给出了可以通过细胞排出的方式改变细胞密度增强细胞培养状态的技术启示，改进细胞周期属于调整细胞比例后必然会达到的结果，而如果要进行排出细胞的操作，必然会涉及和关注到细胞排出的速度，例如对比文件2中记载“每24小时排出部分培养细胞（10-50%）”（参见第0021段），提供了细胞排出速度的一个可选择范围，表明该对比文件已关注到了细胞的排出速度。同时，本领域技术人员可合理推知，生物反应器中细胞的排出速度与反应器中细胞的密度是直接相关的，细胞排出速度越快，单位时间内排出的细胞总量就越多，生物反应器中的细胞总量及密度相应地就会受到影响，因此，在本领域公知常识或对比文件2给出了细胞排出的方式可改变细胞密度的技术启示下，通过控制细胞排出速度可以实时控制反应器中的细胞密度，从而可以调整细胞状态或细胞的周期分布也是本领域技术人员容易想到的。同时，本申请技术方案的效果是本领域技术人员根据对比文件1和常规技术手段或者再结合对比文件2相应特征给出的效果可以合理推知的。综上，复审请求人的理由不成立。
基于上述事实和理由，合议组作出如下决定。
三、决定
维持国家知识产权局于2017年12月04日对本申请作出的驳回决定。
如对本复审请求审查决定不服，根据专利法第41条第2款的规定，复审请求人可以自收到本决定之日起三个月内向北京知识产权法院起诉。
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