发明创造名称：诱导针对靶抗原的免疫应答的抗原结合分子
外观设计名称：
决定号：181891
决定日：2019-06-25
委内编号：1F238276
优先权日：2011-09-30
申请（专利）号：201280058767.9
申请日：2012-09-28
复审请求人：中外制药株式会社
无效请求人：
授权公告日：
审定公告日：
专利权人：
主审员：孙俊荣
合议组组长：韩世炜
参审员：李金光
国际分类号：A61K39/395,A61P35/00,A61P43/00,C07K16/28,C07K16/46,C12N15/09
外观设计分类号：
法律依据：专利法第26条第4款
决定要点
：如果权利要求的概括包含申请人推测的内容，而其效果难以预先确定和评价，应当认为这种概括得不到说明书的支持，不符合专利法第26条第4款有关支持的规定。
全文：
本复审请求涉及申请号为201280058767.9，名称为“诱导针对靶抗原的免疫应答的抗原结合分子”的发明专利申请。申请人为中外制药株式会社。本申请的申请日为2012年09月28日，优先权日为2011年09月30日，公开日为2014年10月08日。
经实质审查，国家知识产权局原审查部门于2017年08月11日以本申请权利要求1-11不符合专利法第26条第4款的规定为由驳回了本发明专利申请。驳回决定所依据的文本为：2014年05月29日本申请进入中国国家阶段时提交的国际申请文件中文译文说明书第1-1141、1147-1257、1264-1529段，说明书附图，说明书核苷酸和氨基酸序列表，说明书摘要，依据专利合作条约第28条或41条修改的说明书第1142-1146、1258-1263段，以及2017年02月28日提交的权利要求第1-11项。驳回决定所针对的权利要求书如下：
“1. 诱导免疫应答的药物组合物的制造方法，其中，该方法包括以下(a)～(f)的步骤：
(a)获得高钙离子浓度条件下抗原结合结构域的抗原结合活性的步骤，
(b)获得低钙离子浓度条件下抗原结合结构域的抗原结合活性的步骤，
(c)选择(a)中得到的抗原结合活性高于(b)中得到的抗原结合活性的抗原结合结构域的步骤，
(d)将编码(c)中选择的抗原结合结构域的多核苷酸与编码在pH中性范围条件下具有FcRn结合活性的FcRn结合结构域的多核苷酸连接的步骤，
(e)将导入了有效连接有(d)中得到的多核苷酸的载体的细胞进行培养的步骤，和
(f)由(e)中培养的细胞的培养液回收抗原结合分子的步骤，
其中所述FcRn结合结构域包含人IgG1抗体的Fc区，其中所述Fc区为下述Fc区：在Fc区的以EU编号表示的位点中，选自257位、308位、428位和434位的至少一个以上的氨基酸与天然型人IgG1的Fc区对应位点的氨基酸不同的Fc区，
其中所述抗原结合结构域包含：选自抗体重链可变区中以Kabat编号表示的95位、96位、100a位和101位的氨基酸以及抗体轻链可变区中以Kabat编号表示的30位、31位、32位、50位和92位的氨基酸的至少一个以上的氨基酸是具有金属螯合活性的氨基酸的抗体可变区，且
其中所述药物组合物包含作为活性成分的抗原结合分子。
2. 诱导免疫应答的药物组合物的制造方法，其中，该方法包括以下(a)～(f)的步骤：
(a)获得高钙离子浓度条件下抗体的抗原结合活性的步骤，
(b)获得低钙离子浓度条件下抗体的抗原结合活性的步骤，
(c)选择(a)中得到的抗原结合活性高于(b)中得到的抗原结合活性的抗体的步骤，
(d)将编码(c)中选择的抗体的抗原结合结构域的多核苷酸与编码在pH中性范围条件下具有FcRn结合活性的FcRn结合结构域的多核苷酸连接的步骤，
(e)将导入了有效连接有(d)中得到的多核苷酸的载体的细胞进行培养的步骤，和
(f)由(e)中培养的细胞的培养液回收抗原结合分子的步骤，
其中所述FcRn结合结构域包含人IgG1抗体的Fc区，其中所述Fc区为下述Fc区：在Fc区的以EU编号表示的位点中，选自257位、308位、428位和434位的至少一个以上的氨基酸与天然型人IgG1的Fc区对应位点的氨基酸不同的Fc区，
其中所述抗原结合结构域包含：选自抗体重链可变区中以Kabat编号表示的95位、96位、100a位和101位的氨基酸以及抗体轻链可变区中以Kabat编号表示的30位、31位、32位、 50位和92位的氨基酸的至少一个以上的氨基酸是具有金属螯合活性的氨基酸的抗体可变区，且
其中所述药物组合物包含作为活性成分的抗原结合分子。
3. 抗原结合分子的制造方法，其中，该方法包括以下(a)～(f)的步骤：
(a)获得pH中性范围条件下抗原结合结构域的抗原结合活性的步骤，
(b)获得pH酸性范围条件下抗原结合结构域的抗原结合活性的步骤，
(c)选择(a)中得到的抗原结合活性高于(b)中得到的抗原结合活性的抗原结合结构域的步骤，
(d)将编码(c)中选择的抗原结合结构域的多核苷酸与编码在pH中性范围条件下具有FcRn结合活性的FcRn结合结构域的多核苷酸连接的步骤，
(e)将导入了有效连接有(d)中得到的多核苷酸的载体的细胞进行培养的步骤，和
(f)由(e)中培养的细胞的培养液回收抗原结合分子的步骤，
其中所述FcRn结合结构域包含人IgG1抗体的Fc区，其中所述Fc区为下述Fc区：在Fc区的以EU编号表示的位点中，选自257位、308位、428位和434位的至少一个以上的氨基酸与天然型人IgG1的Fc区对应位点的氨基酸不同的Fc区，且
其中所述抗原结合结构域包含：至少一个以上的氨基酸是His的抗体可变区。
4. 抗原结合分子的制造方法，其中，该方法包括以下(a)～(f)的步骤：
(a)获得pH中性范围条件下抗体的抗原结合活性的步骤，
(b)获得pH酸性范围条件下抗体的抗原结合活性的步骤，
(c)选择(a)中得到的抗原结合活性高于(b)中得到的抗原结合活性的抗体的步骤，
(d)将编码(c)中选择的抗体的抗原结合结构域的多核苷酸与编码在pH中性范围条件下具有FcRn结合活性的FcRn结合结构域的多核苷酸连接的步骤，
(e)将导入了有效连接有(d)中得到的多核苷酸的载体的细胞进行培养的步骤，和
(f)由(e)中培养的细胞的培养液回收抗原结合分子的步骤，
其中所述FcRn结合结构域包含人IgG1抗体的Fc区，其中所述Fc区为下述Fc区：在Fc区的以EU编号表示的位点中，选自257位、308位、428位和434位的至少一个以上的氨基酸与天然型人IgG1的Fc区对应位点的氨基酸不同的Fc区，且
其中所述抗原结合结构域包含：至少一个以上的氨基酸是His的抗体可变区。
5. 权利要求1～4中任一项的方法，其中，所述抗原结合分子为具有针对所述抗原的中和活性的抗原结合分子。
6. 权利要求1～4中任一项的方法，其中，所述抗原结合分子为具有针对表达所述抗原的细 胞的细胞毒活性的抗原结合分子。
7. 权利要求1～4中任一项的方法，其中，所述Fc区为含有Fc区的以EU编号表示的选自以下的至少一个以上的氨基酸的Fc区：
257位氨基酸为Ala，
308位氨基酸为Pro，
428位氨基酸为Leu，和
434位氨基酸为Tyr。
8. 权利要求1～4中任一项的方法，其中，所述Fc区的Fcγ受体结合活性具有下述特征：与EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG1的Fc区的Fcγ受体结合活性相比高。
9. 权利要求8的方法，其中，所述Fcγ受体为FcγRIa、FcγRIIa(R)、FcγRIIa(H)、FcγRIIb、FcγRIIIa(V)或FcγRIIIa(F)。
10. 权利要求9的方法，其中，所述Fc区为含有Fc区中以EU编号表示的位点中选自以下的至少一个以上的氨基酸的Fc区：
221位氨基酸为Lys或Tyr中任一个，
222位氨基酸为Phe、Trp、Glu或Tyr中任一个，
223位氨基酸为Phe、Trp、Glu或Lys中任一个，
224位氨基酸为Phe、Trp、Glu或Tyr中任一个，
225位氨基酸为Glu、Lys或Trp中任一个，
227位氨基酸为Glu、Gly、Lys或Tyr中任一个，
228位氨基酸为Glu、Gly、Lys或Tyr中任一个，
230位氨基酸为Ala、Glu、Gly或Tyr中任一个，
231位氨基酸为Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一个，
232位氨基酸为Glu、Gly、Lys或Tyr中任一个，
233位氨基酸为Ala、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
234位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
235位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
236位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
237位氨基酸为Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
238位氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
239位氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
240位氨基酸为Ala、Ile、Met或Thr中任一个，
241位氨基酸为Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr中任一个，
243位氨基酸为Leu、Glu、Leu、Gln、Arg、Trp或Tyr中任一个，
244位氨基酸为His，
245位氨基酸为Ala，
246位氨基酸为Asp、Glu、His或Tyr中任一个，
247位氨基酸为Ala、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Thr、Val或Tyr中任一个，
249位氨基酸为Glu、His、Gln或Tyr中任一个，
250位氨基酸为Glu或Gln中任一个，
251位氨基酸为Phe，
254位氨基酸为Phe、Met或Tyr中任一个，
255位氨基酸为Glu、Leu或Tyr中任一个，
256位氨基酸为Ala、Met或Pro中任一个，
258位氨基酸为Asp、Glu、His、Ser或Tyr中任一个，
260位氨基酸为Asp、Glu、His或Tyr中任一个，
262位氨基酸为Ala、Glu、Phe、Ile或Thr中任一个，
263位氨基酸为Ala、Ile、Met或Thr中任一个，
264位氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr中任一个，
265位氨基酸为Ala、Leu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Val、Trp或Tyr中任一个，
266位氨基酸为Ala、Ile、Met或Thr中任一个，
267位氨基酸为Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
268位氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Trp中任一个，
269位氨基酸为Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
270位氨基酸为Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr中任一个，
271位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
272位氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
273位氨基酸为Phe或Ile中任一个，
274位氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
275位氨基酸为Leu或Trp中任一个，
276位氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
278位氨基酸为Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp中任一个，
279位氨基酸为Ala，
280位氨基酸为Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gln、Trp或Tyr中任一个，
281位氨基酸为Asp、Lys、Pro或Tyr中任一个，
282位氨基酸为Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一个，
283位氨基酸为Ala、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg或Tyr中任一个，
284位氨基酸为Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr中任一个，
285位氨基酸为Asp、Glu、Lys、Gln、Trp或Tyr中任一个，
286位氨基酸为Glu、Gly、Pro或Tyr中任一个，
288位氨基酸为Asn、Asp、Glu或Tyr中任一个，
290位氨基酸为Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp或Tyr中任一个，
291位氨基酸为Asp、Glu、Gly、His、Ile、Gln或Thr中任一个，
292位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr中任一个，
293位氨基酸为Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
294位氨基酸为Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
295位氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
296位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr或Val中任一个，
297位氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
298位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
299位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr中任一个，
300位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp中任一个，
301位氨基酸为Asp、Glu、His或Tyr中任一个，
302位氨基酸为Ile，
303位氨基酸为Asp、Gly或Tyr中任一个，
304位氨基酸为Asp、His、Leu、Asn或Thr中任一个，
305位氨基酸为Glu、Ile、Thr或Tyr中任一个，
311位氨基酸为Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr中任一个，
313位氨基酸为Phe，
315位氨基酸为Leu，
317位氨基酸为Glu或Gln，
318位氨基酸为His、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr中任一个，
320位氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
322位氨基酸为Ala、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Pro、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
323位氨基酸为Ile，
324位氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
325位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
326位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
327位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
328位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
329位氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
330位氨基酸为Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
331位氨基酸为Asp、Phe、His、Ile、Leu、Met、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
332位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中任一个，
333位氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val或Tyr中任一个，
334位氨基酸为Ala、Glu、Phe、Ile、Leu、Pro或Thr中任一个，
335位氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr中任一个，
336位氨基酸为Glu、Lys或Tyr中任一个，
337位氨基酸为Glu、His或Asn中任一个，
339位氨基酸为Asp、Phe、Gly、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Ser或Thr中任一个，
376位氨基酸为Ala或Val中任一个，
377位氨基酸为Gly或Lys中任一个，
378位氨基酸为Asp，
379位氨基酸为Asn，
380位氨基酸为Ala、Asn或Ser中任一个，
382位氨基酸为Ala或Ile中任一个，
385位氨基酸为Glu，
392位氨基酸为Thr，
396位氨基酸为Leu，
421位氨基酸为Lys，
427位氨基酸为Asn，
428位氨基酸为Phe或Leu中任一个，
429位氨基酸为Met，
434位氨基酸为Trp，
436位氨基酸为Ile、和
440位氨基酸为Gly、His、Ile、Leu或Tyr中任一个。
11. 权利要求8的方法，其中，所述Fc区是进行了下述修饰的Fc区：使得Fc区的EU编号297位连接的糖链组成为连接岩藻糖缺失糖链的Fc区比例变高、或附加有平分型N-乙酰葡糖胺的Fc区比例变高。”
驳回决定认为：权利要求1中所述抗原结合分子的抗原结合结构域、FcRn结合结构域的结构和特性是本申请解决其技术问题的关键，然而权利要求1仅采用了功能性限定以及采用了包含大量序列、功能不确定的抗原结合结构域和FcRn结合结构域多肽分子。根据本申请说明书的记载和本领域现有技术，不仅需要改造FcRn结合结构域使其在pH中性范围条件下具有FcRn结合活性，甚至还要使其在pH中性范围条件下的FcRn结合活性高于在pH酸性范围条件下对FcRn的结合活性，这应当是更困难的。因此，对于FcRn结合结构域的每个氨基酸的替换都非常关键。权利要求1中没有限定突变后的氨基酸种类，所得到的变体是否仍然具有FcRn结合活性是不确定和难以预料的。对于抗原结合结构域也类似，因为能够解决本申请技术问题的抗原结合分子，需要具有抗原结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域，更具体的是，与低钙离子浓度条件下对该抗原的结合活性相比，高钙离子浓度条件下的抗原结合活性高的抗原结合结构域；或者是与pH酸性范围条件下对该抗原的结合活性相比，pH中性范围条件下的抗原结合活性高的抗原结合结构域。而目前权利要求1仅以功能和个别位点上氨基酸与天然型人IgG1的Fc区对应位点的氨基酸不同或具有金属螯合活性的氨基酸来限定FcRn结合结构域和抗原结合结构域，这不足以使得本领域技术人员明确具有怎样具体结构的药物组合物才能实现诱导免疫应答的技术效果，超出了本领域技术人员的合理预期。因此权利要求1得不到说明书的支持，不符合专利法第26条第4款的规定。权利要求2-11也基于相同的理由得不到说明书的支持，不符合专利法第26条第4款的规定。
申请人中外制药株式会社（下称复审请求人）对上述驳回决定不服，于2017年11月22日向国家知识产权局提出了复审请求，同时修改了权利要求书，其中对权利要求1-4进行了修改，其中在权利要求1和2中将“具有金属螯合活性的氨基酸”修改为“Ser、Thr、Asn、Gln、Asp或Glu”，在权利要求3和4中增加了“CDRs中”的特征。
复审请求人认为：根据本申请说明书实施例3-4以及说明书附图4-6的记载，本领域技术人员能够理解，在血浆中的中性pH范围内或在血浆中高钙离子浓度条件下结合抗原并且在体内中的酸性pH范围内或在内体中低钙离子浓度条件下解离抗原的抗原结合结构域的抗原结合分子将会促进抗原结合到细胞中以达到诱导免疫应答的程度，并且该抗原结合分子能够用作诱导免疫应答的药物组合物。对于FcRn结合结构域，本申请说明书表5显示，其中257、308、428和434位的氨基酸被改变的IgG1 Fc变体全部显示了在中性pH范围内的增强的FcRn结合活性，基于此，本领域技术人员能够理解，只要变体具有在上述位置的至少一个或多个氨基酸突变，IgG1 Fc区变体将具有增强的FcRn结合活性；对于抗原结合结构域，根据本申请说明书实施例2-18的记载，本领域技术人员能够理解抗体重链可变区第95、96、100和101位的氨基酸，以及抗体轻链可变区第30、31、32、50和92位的氨基酸，存在至少一个以上的氨基酸是Ser 、Thr 、Asn、 Gln 、Asp或Glu的抗体可变区的抗原结合结构域具有本发明中所述的钙离子浓度依赖性抗原结合活性。综上，本领域技术人员能够理解结构和功能之间的关联，修改后的权利要求书能够得到说明书的充分支持，符合专利法第26条第4款的规定。
经形式审查合格，国家知识产权局于2017年12月22日依法受理了该复审请求，并将其转送至原审查部门进行前置审查。
原审查部门在前置审查意见书中认为，修改后的权利要求仍然没有限定抗原结合结构域和FcRn结合结构域的具体序列结构，而仅以功能性限定和个别位点的氨基酸残基选择对抗原结合结构域或FcRn结合结构域进行了限定，仍然概括了过宽的保护范围，仍然得不到说明书的支持，因而坚持原驳回决定。
随后，国家知识产权局成立合议组对本案进行审理。
合议组于2018年10月31日向复审请求人发出复审通知书，指出：（1）权利要求1对变体的FcRn结合结构域仅限定了氨基酸突变的位置，对于抗原结合结构域限定了在诸多位置上至少一个以上选自所述类型的氨基酸，上述限定方式包含了大量氨基酸序列和功能不确定的抗原结合分子变体，而本领域技术人员又难以预料上述抗原结合分子变体中哪些变体仍然具有原有的活性，并更加适应生物体内钙离子浓度和pH的变化，以及诱导出更强的免疫应答。对于FcRn结合结构域，本申请说明书仅罗列了部分在257、308、428和434位发生氨基酸特定替换或与其他位置特定氨基酸替换组合的变体，并不能由此预测出上述位置的任意氨基酸替换或任意组合的结合活性，况且表5-1至5-33中给出的是中性条件下的FcRn结合活性KD(M)值，而实施例3记载了只有与靶抗原pH依赖性地结合且增强了pH7.4的FcRn结合的特定IgG抗体Fv4-F157才可诱导针对靶抗原的获得性免疫（参见说明书第66-113页表5-1至5-33以及第145页第17-22行），由此也可以看出，即使对于表5-1至5-33中罗列的变体，其是否具有诱导针对靶抗原的获得性免疫的功能也是未知的和不确定的。对于抗原结合结构域，实施例4-实施例18研究了钙离子浓度变化对抗体与受体之间结合能力的影响，抗体变体在不同钙离子浓度下与受体的结合活性，以及抗体与钙离子之间的结合模式，至于在所述高钙离子浓度下改变了结合活性的抗体变体是否具有诱导针对靶抗原的获得性免疫的功能，本申请说明书中也未给出具体的实例以及充足的实验数据。本领域技术人员根据说明书的上述记载并不能对权利要求1所包含的大量突变后的变体进行合理的功能预测，另外，即使权利要求1中还限定了在不同钙离子条件下进行结合能力比较的步骤，但是，仅根据筛选变体的方法，本领域技术人员也是无法合理预期变体功能的。综上，权利要求1的概括包含了申请人推测的内容，且效果难以预先确定和评价，得不到说明书的支持，不符合专利法第26条第4款的规定。基于与评述权利要求1相似的理由，利要求2-4同样也不符合专利法第26条第4款的规定。权利要求5-11作为权利要求1-4的从属权利要求，没有克服上述缺陷，也不符合专利法第26条第4款的规定。
复审请求人于2019 年02月15日提交了意见陈述书和权利要求书全文修改替换页（共11页11项），其中将权利要求1-4中的Fc区限定为“根据EU编号，在Fc区具有表5-1至表5-33显示的置换的Fc区”，将权利要求3和4所要求保护的主题修改为“诱导免疫应答的药物组合物的制造方法”，并增加了“其中所述药物组合物包含作为活性成分的抗原结合分子”的特征。
修改后的权利要求1如下：
“1. 诱导免疫应答的药物组合物的制造方法，其中，该方法包括以下(a)～(f)的步骤：
(a)获得高钙离子浓度条件下抗原结合结构域的抗原结合活性的步骤，
(b)获得低钙离子浓度条件下抗原结合结构域的抗原结合活性的步骤，
(c)选择(a)中得到的抗原结合活性高于(b)中得到的抗原结合活性的抗原结合结构域的步骤，
(d)将编码(c)中选择的抗原结合结构域的多核苷酸与编码在pH中性范围条件下具有FcRn结合活性的FcRn结合结构域的多核苷酸连接的步骤，
(e)将导入了有效连接有(d)中得到的多核苷酸的载体的细胞进行培养的步骤，和
(f)由(e)中培养的细胞的培养液回收抗原结合分子的步骤，
其中所述FcRn结合结构域包含人IgGl抗体的Fc区，其中所述Fc区为下述Fc区：根据EU编号，在Fc区中具有表5-1至表5-33显示的置换的Fc区，
其中所述抗原结合结构域包含：选自抗体重链可变区中以Kabat编号表示的95位、96位、100a位和101位的氨基酸以及抗体轻链可变区中以Kabat编号表示的30位、31位、32位、50位和92位的氨基酸的至少一个以上的氨基酸是Ser、Thr、Asn、Gln、Asp或Glu的抗体可变区，且
其中所述药物组合物包含作为活性成分的抗原结合分子。”
复审请求人认为：（1）修改后的权利要求书已经将Fc区限定为说明书表5-1至5-33显示的置换的Fc区，表中所示F157的KD值为1.5E-07，其对FcRn的亲和力远高于IgG1。实施例3显示F157可诱导针对靶抗原的获得性免疫，实施例4显示在给予增强了小鼠FcRn结合的pH依赖性结合抗体Fv4-mF3和除增强小鼠FcRn结合之外还增强了小鼠FcgR结合的pH依赖性结合抗体Fv4-mFa30的组中，确认存在可见小鼠抗人IL-6受体抗体的抗体效价上升的个体。由此可知修改后的Fc能够得到说明书的支持。（2）本申请说明书第174页参考实施例20（20-3）记载了“结果确认到，通过对钙依赖性地与抗原结合的抗体赋予PH7.4下的FcRn结合活性，可以进一步加速抗原从血浆中的消除”、“这些数据暗示，与PH依赖性地与抗原结合的抗体相同地，Ca依赖性地与抗原结合的抗原也在内体内将抗原解离”，由此可知，本领域技术人员可以确定具有钙依赖性靶抗原结合活性和Ph7.4下增强的FcRn结合的抗体可以用于诱导获得性免疫。本申请参考实施例7描述了如何通过构建Ca文库来制备Ca浓度依赖性抗体分子，参考实施例3-3、4-2、5-3和6给出了一些与钙离子结合特性相关的位点，在这些位点选择具有金属螯合效应的如Ser,Thr,Asp或Glu就能赋予可变区的Ca依赖性。另外，关于所述抗原结合结构域的可变区，权利要求中已经限定了筛选方法，不具有pH依赖性或Ca依赖性的可变区将不会通过该筛选方法而获得，因此，没有必要通过限定可变区位置来确保pH依赖性或Ca依赖性。
在上述程序的基础上，合议组认为本案事实已经清楚，可以作出审查决定。
二、决定的理由
审查文本的认定
复审请求人于2019年02月15日提交了权利要求书全文修改替换页（共11页11项），经审查，所述修改符合专利法第33条和专利法实施细则第61条第1款的规定，因此，本复审决定针对的文本为：2014年05月29日本申请进入中国国家阶段时提交的国际申请文件中文译文说明书第1-1141、1147-1257、1264-1529段，说明书附图，说明书核苷酸和氨基酸序列表，说明书摘要，依据专利合作条约第28条或41条修改的说明书第1142-1146、1258-1263段，以及2019年02月15日提交的权利要求第1-11项。
2、关于专利法第26条第4款
专利法第26条第4款规定，权利要求书应当以说明书为依据，清楚、简要地限定要求专利保护的范围。
根据该款规定，如果权利要求的概括包含申请人推测的内容，而其效果难以预先确定和评价，应当认为这种概括得不到说明书的支持，不符合专利法第26条第4款有关支持的规定。
本申请权利要求1要求保护诱导免疫应答的药物组合物的制造方法，其中，该方法包括以下(a)～(f)的步骤： (a)获得高钙离子浓度条件下抗原结合结构域的抗原结合活性的步骤，（b)获得低钙离子浓度条件下抗原结合结构域的抗原结合活性的步骤，(c)选择(a)中得到的抗原结合活性高于(b)中得到的抗原结合活性的抗原结合结构域的步骤，(d)将编码(c)中选择的抗原结合结构域的多核苷酸与编码在pH中性范围条件下具有FcRn结合活性的FcRn结合结构域的多核苷酸连接的步骤，(e)将导入了有效连接有(d)中得到的多核苷酸的载体的细胞进行培养的步骤，和 (f)由(e)中培养的细胞的培养液回收抗原结合分子的步骤，其中所述FcRn结合结构域包含人IgG1抗体的Fc区，其中所述Fc区为下述Fc区：根据EU编号，在Fc区具有表5-1至表5-33显示的置换的Fc区，其中所述抗原结合结构域包含：选自抗体重链可变区中以Kabat编号表示的95位、96位、100a位和101位的氨基酸以及抗体轻链可变区中以Kabat编号表示的30位、31位、32位、50位和92位的氨基酸的至少一个以上的氨基酸是Ser、Thr、Asn、Gln、Asp或Glu的抗体可变区，且其中所述药物组合物包含作为活性成分的抗原结合分子。
根据本申请说明书的整体记载可知，生物体内的离子浓度和pH是存在变化的，例如，生物体血浆是高钙离子浓度和pH中性范围，生物体的早期内体内是低钙离子浓度和酸性pH范围。本申请之所以对抗原结合分子的抗原结合结构域和FcRn结合结构域作出氨基酸的缺失、添加、插入和/或置换等突变，目的在于使抗原结合分子变体中的抗原结合结构域在血浆高钙离子浓度和中性pH范围下与抗原的结合能力更强，使变体中的FcRn结合结构域在内体内pH酸性范围内具有更强的FcRn结合活性，同时针对FcRn结合结构域在高钙离子浓度条件下不存在或弱的FcRn结合活性的情况下，改变其氨基酸赋予FcRn结合活性，从而使得变体更加适应生物体中的钙离子浓度和pH值的变化，使变体具有在不同钙离子浓度和pH值下更好发挥其诱导免疫应答功能的能力（参见说明书第5页、第41页、第46页、第53-54页、第63-64页）。对于权利要求1中制备药物组合物的抗原结合分子，目前权利要求1对变体的FcRn结合结构域虽然限定为表5-1至表5-33，但其仍然包含了大量的变体，对于抗原结合结构域限定了在诸多位置上至少一个以上选自所述类型的氨基酸，上述限定方式包含了大量氨基酸序列和功能不确定的抗原结合分子变体，而本领域技术人员又难以预料上述抗原结合分子变体中哪些变体仍然具有原有的活性，并更加适应生物体内钙离子浓度和pH的变化，以及诱导出更强的免疫应答，诱导针对靶抗原的获得性免疫。对于FcRn结合结构域，本申请说明书第66-113页表5-1至5-33中给出的是中性条件下（pH7.0）的FcRn结合活性KD(M)值，而说明书第145页第17-22行记载的实施例3只有与靶抗原pH依赖性地结合且增强了pH7.4的FcRn结合的特定IgG抗体Fv4-F157才可诱导针对靶抗原的获得性免疫。由此可以看出，对于表5-1至5-33中罗列的变体，其是否具有诱导针对靶抗原的获得性免疫的功能也是未知且不确定的。对于抗原结合结构域，说明书实施例4-参考实施例18记载了钙离子浓度变化对抗体与受体之间结合能力的影响，抗体变体在不同钙离子浓度下与受体的结合活性，以及抗体与钙离子之间的结合模式。至于在所述高钙离子浓度下改变了结合活性的抗体变体是否具有诱导针对靶抗原的获得性免疫的功能，本申请说明书中未给出足够的实例以及充足的实验数据。本领域技术人员根据说明书的上述记载并不能对权利要求1所包含的大量突变后的变体进行合理的功能预测。综上，权利要求1的概括包含了申请人推测的内容，且效果难以预先确定和评价，得不到说明书的支持，不符合专利法第26条第4款的规定。基于与评述权利要求1相似的理由，权利利要求2-4同样也不符合专利法第26条第4款的规定。权利要求5-11作为权利要求1-4的从属权利要求，没有克服上述缺陷，也不符合专利法第26条第4款的规定。
3、对复审请求人相关意见的评述
对于复审请求人的意见，合议组认为：
（1）如前所述，对于FcRn结合结构域，本申请说明书第66-113页表5-1至5-33表中给出的是中性条件下的FcRn结合活性KD(M)值，而实施例3(说明书第145页)第17-22行则记载了普通IgG抗体（H54/L28-IgG1）、与靶抗原pH依赖性地结合的IgG抗体（Fv4-IgH1）或只增强了pH7.4的FcRn结合的IgG抗体（H54/L28-IgG1）体内给予，也不能够诱导针对靶抗原的获得性免疫，只有与靶抗原pH依赖性地结合且增强了pH7.4的FcRn结合的特定IgG抗体Fv4-F157才可诱导针对靶抗原的获得性免疫，由此可以看出，即使对于表5-1至5-33中罗列的变体，其是否具有诱导针对靶抗原的获得性免疫的功能也是未知的、不确定的，说明书第148页实施例4（4-5）虽然记载了给予增强了小鼠FcRn结合的pH依赖性结合抗体Fv4-mF3和除增强小鼠FcRn结合之外还增强了小鼠FcgR结合的pH依赖性结合抗体Fv4-mFa30的组中，确认存在可见小鼠抗人IL-6受体抗体的抗体效价上升的个体，但是其给出的结论同样是具有与靶抗原pH依赖性地结合的活性、且增强了pH7.4的FcRn结合的抗原结合分子能够诱导获得性免疫，并不能证明表5-1至5-33表中具有所述中性条件下FcRn结合活性KD(M)值的变体也能够产生获得性免疫。
（2）对于抗原结合结构域，参考实施例4-参考实施例18研究了钙离子浓度变化对抗体与受体之间结合能力的影响，抗体变体在不同钙离子浓度下与受体的结合活性，以及抗体与钙离子之间的结合模式，至于在所述高钙离子浓度下改变了结合活性的抗体变体是否具有诱导针对靶抗原的获得性免疫的功能，本申请说明书中也未给出足够的实例以及充足的实验数据，参考实施例20也仅给出了6RL#9-N434W抗体或FH4-N434W抗体具有通过对钙依赖性地与抗原结合的抗体赋予pH7.4下的FcRn结合活性，可进一步加速抗原从血浆中的消除，在内体内将抗原解离的特性，从中并不能概括得到权利要求1中所述的抗原结合结构域均可实现上述目的。对于修改后的30位、31位、32位、50位和92位的氨基酸的至少一个以上的氨基酸是Ser、Thr、Asn、Gln、Asp或Glu的抗体可变区，参考实施例3-6也仅证明了hVk5-2的CDR区中上述位点（如32位和92位）的氨基酸（如Asp、Glu）残基对于抗体与Ca的结合是需要的，但是其并不能证明对于抗体来说，在上述位点处作出上述Asp或Glu的替换变化将会增强抗体的抗原结合活性，并赋予抗体结合活性的Ca依赖性，更不能证明能够取得获得性免疫的技术效果。综上，复审请求人的意见不具备说服力。
基于上述事实和理由，本案合议组作出如下复审决定。
三、决定
维持国家知识产权局于2017 年11 月22 日对本申请作出的驳回决定。
如对本复审请求审查决定不服,根据专利法第41条第2款的规定,请求人自收到本决定之日起三个月内可以向北京知识产权法院起诉。
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