发明创造名称：一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片及其制备方法
外观设计名称：
决定号：180030
决定日：2019-05-22
委内编号：1F236412
优先权日：2014-02-14
申请（专利）号：201410359993.1
申请日：2014-07-24
复审请求人：青岛农业大学
无效请求人：
授权公告日：
审定公告日：
专利权人：
主审员：李洋
合议组组长：潘爱群
参审员：周洋
国际分类号：C12Q1/68
外观设计分类号：
法律依据：专利法第22条第3款
决定要点
：如果发明与最接近现有技术的区别技术特征为另一份对比文件中披露的相关技术手段，或者为公知常识，例如教科书或者工具书等中披露的解决该技术问题的技术手段，则认为现有技术中已经给出将该区别技术特征应用到该最接近现有技术以解决其存在的技术问题（即发明实际解决的技术问题）的启示，发明是显而易见的，不具有突出的实质性特点，不具备创造性。
全文：
本复审请求涉及申请号为201410359993.1，名称为“一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片及其制备方法”的发明专利申请。申请人为青岛农业大学。本申请的申请日为2014年07月24日，优先权日为2014年02月14日，公开日为2014年12月24日。
经实质审查，国家知识产权局原审查部门于2017年08月10日发出驳回决定，驳回了本发明专利申请，其理由是：权利要求1-6不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。驳回决定所依据的文本为：申请日提交的说明书第1-153段、附图图1-图8、说明书摘要、摘要附图、说明书核苷酸和氨基酸序列表；以及2016年08月13日提交的权利要求第1-6项。驳回决定所针对的权利要求书如下：
“1. 一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片，其特征在于，该检测检疫性实蝇的基因芯片采用Corning氨基化修饰基片，此基片为玻璃基片，表面已修饰有氨基活性基团；其上固定有用于检测危险性实蝇的寡核苷酸探针，40bp，所述寡核苷酸探针可分别与待测样品进行杂交反应；基片尺寸为25mm×75mm；所述寡核苷酸探针组含选自下述中的至少一种寡核苷酸探针序列：
印加按实蝇 GGCAGTATTCGCAATTATAGCTGGATTCATCCACTGATACCCT
墨西哥按实蝇 ACACATATAATATACACATAATGACAACATGAGCAGCCCTCGG
墨西哥按实蝇 AGCAGTATTCGCAATTATAGCTGGATTTATCCACTGATACCCT
暗色实蝇 ACAGTTGGAGGATTAACCGGAGTAATACTTGCTAATTCTTCTG
暗色实蝇 GCTACACTTCATGGAACCCAATTAAATTACTCCCCAGCAATAC
暗色实蝇 TCTTACATGACACTTACTATGTTGTAGCCCACTTCCATTATGT
中美按实蝇 TTCCCAACGACAGGTTATTTACCCTATACAGCTAAGTTCATCA
蜜柑大实蝇 GAGAGAATAGTAACCCAACGACAAACAGTCTACCCCACACAAT
桃实蝇 GGGCAGTATTCGCTATTATAGCAGGGTTCGTTCACTGATACCC
蒲桃实蝇 GACGTTGATACTCGTGCTTACTTCACCTCAGCCACAATAATTA
艳实蝇 GTTGGAGGACTGACGGGAGTCGTCCTTGCTAATTCATCTGTAG
普通果实蝇 CGACGATATTCTGATTACCCCGACGCTTATACAACATGAAACG
番石榴实蝇 ACACGGACAAACTATTGAAATAATCTGAACAATTCTCCCAGCA
黄瓜果实蝇 ATCTGAGAAAGATTAGTTACTCAACGCCAAGTAATCTATCCAA
瓜实蝇 GTTGTGTAAGCATCTGGGTAGTCGGAGTAACGTCGAGGTATTC
大洋洲实蝇 CTAGCCACATTACACGGTACTCAACTAAACTATTCTCCAGCCA
日本南瓜实蝇 TGGGCAACCACATAGTAAGTATCATGAAGGATAATGTCAACGG
日本南瓜实蝇 CGTAGTGGAAGTGGGCAACCACATAGTAAGTATCATGAAGGAT
平展实蝇 ATCTTAGTGACAGCCGCAGATGTAATTCATTCTTGAACAGTCC
单带果实蝇 GTAGGAATAGATGTGGATACTCGTGCTTATTTCACCTCAGCCA
扎维斯实蝇 GAATGCCTCGGCGATACTCCGACTATCCGGACGCATATACAAC
扎维斯实蝇 TAGCTGGATTTGTTCACTGATACCCTTTATTCACAGGACTGGT
辣椒实蝇 ATCGTGGAGGATAATATCTACAGACGAGTTAGCGAGAACAACC
油榄实蝇 ACACTGATACCCCCTATTCACCGGACTAAATCTAAACCCTAAT
黑肩角桔实蝇 TCTTAATAAATCGCCCTGGGTTATTTTACGGACAATGTTCAGA
南亚果实蝇 TATTATGAGCTTTAGGATTTGTGTTTTTATTCACAGTTGGAGG
昆士兰实蝇 TAATACTAATCCTGTAAAAAGTGGGTACCAGTGAACAAACCCT
三带实蝇 GTTTGTCCATTGATACCCCCTATTTACAGGGTTGTCGCTAAAC
三带实蝇 GTTGTGTAAGCATCTGGGTAATCTGAGTACCGTCGTGGTATCC
黑羽小条实蝇 GCTGCCGATGTAATTCATTCTTGAACAATTCCTGCTTTAGGAG
地中海实蝇 AGACGTTGACACACGAGCTTACTTTACATCAGCAACTATAATT
非洲芒果实蝇 TAGTAACAGCAGCCGACGTAATTCATTCTTGAACAATTCCTGC
非洲芒果实蝇 ACCTGGTTTATTTTATGGTCAATGTTCAGAAATCTGCGGAGCT
纳塔尔实蝇 ATTCCGAATCCAGGTAGAATAAAATATATACTTCGGGGTGACC
樱桃绕实蝇 GCATCTGGATAATCTGAGTATCGACGAGGTATTCCTGATAGGC
苹果绕实蝇 AGCTAAAACAACTCCTGTTAAACCTCCTACTGTAAATAGAAAA
桔小实蝇 TCATTTGAGAAAGTTTAGTCACGCAGCGACAAGTAATCTACCG
桔大实蝇 TGGCAGGATTCGTACATTGATATCCATTATTCACAGGACTCGC
桔大实蝇 TTCGTACATTGATATCCATTATTCACAGGACTCGCCCTAACCC
桔大实蝇 ACACAACGACAAACAATCTACCCTACGCAACTAAGTTCTTCAA
所述危险性实蝇为：印加按实蝇Anastrepha distincta、墨西哥按实蝇A.ludens、暗色实蝇A.serpentina、中美按实蝇A.striata、南亚果实蝇Bactrocera tau、瓜实蝇B.cucurbitae、桃实蝇B.zonata、蒲桃实蝇B.albistrigata、艳实蝇B.calophylli、桔小实蝇B.dorsalis、普通果实蝇B.caudata、番石榴实蝇B.correcta、油橄榄实蝇B.oleae、黄瓜果实蝇B.cucumis、大洋洲实蝇B.curvipennis、日本南瓜实蝇B.depressa、平展实蝇B.expandens、单带果实蝇B.frauenfeldi、扎维斯实蝇B.jarvisi、辣椒实蝇B.latifrons、黑肩角桔实蝇B.psidii、昆士兰实蝇B.tryoni、三带实蝇B.umbrosa、蜜柑大实蝇B.tsuneonis、桔大实蝇B.minax、地中海实蝇Ceratitis capitata、非洲芒果实蝇C.cosyra、黑羽小条实蝇C.anonae、纳塔尔实蝇C.Rosa、非洲芒果实蝇C.cosyra苹果绕实蝇Rhagoletis pomonella、樱桃绕实蝇R.Cerasi。
2. 一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)芯片基片的准备
本芯片基片采用Corning氨基化修饰基片，此基片为玻璃基片，表面己修饰有氨基活性基团；基片尺寸为25mm×75mm；
(2)探针的设计及制备
1.探针的设计
探针的设计是基因芯片开发的关键，科学、合理和可靠的探针设计不仅可以提高芯片的可靠性，还可以降低芯片制作成本；本芯片31种纳入检测分析的实蝇序列片段，除了桔小实蝇B.dorsalis，桔大实蝇B.minax，瓜实蝇B.cucurbitae，南亚果实蝇B.tau，普通果实蝇B.caudata，地中海实蝇C.capitata，油榄实蝇B.oleae和昆士兰实蝇B.tryoni的片段序列是由本实验室扩增测序所得，其余实蝇序列片段均取自NCBI网站的GenBank数据库；
本芯片的探针设计步骤主要分为以下6个步骤：1)探针源序列的确定；2)源序列的收集与下载；3)对收集到的源序列进行序列比对后，初步确定一批31种实蝇之间的特异性序列(40bp)；4)通过Array designer 4.25对特异性序列进行芯片探针质量评估；5)将通过评估的探针序列进行在NCBI网站进行Blast比对，进一步确定探针的特异性；6)确定最终探针序列；另外还有质控探针的设计，分为阳性质控探针和阴性质控探针；探针序列信息见表1；
1.1探针源序列的确定
为了获得最丰富的探针特异性的比对资源，提高基因芯片的可靠性，我们在GenBank数据库中实蝇序列信息登录相对集中的序列作为探针设计的母版序列；经比对后发现线粒体细胞色素氧化酶I和细胞色素氧化酶II基因片段是登录最为集中的序列片段；3段序列作为探针设计的源序列：F，S和DQ，它们的扩增引物序列序列分别为：
F上游引物：5′-TACAGTTGGAATAGACGTTGATAC-3′，
F下游引物：5′-TCCAATGCACTAATCTGCCATATTA-3′；
S上游引物：5′-ATGGCAGATTAGTGCAATGG-3′，
S下游引物：5′-GTTTAAGAGACCAATACTTG-3′；
DQ上游引物：5′-ATGGCAGATTAGTGCAATGG-3′，
DQ下游引物：5′-ACTGTAAATATATGATGAGCTCA-3′；
1.2探针源序列的收集与下载
以桔小实蝇的上述3个同源序列作为模板序列，从GenBank数据库中收集下载31种实蝇的上述3个同源序列；由于F和S序列有重叠，所以将F和S合并为一个连续序列；在收集和下载源序列时，为了减少不同地理种群之间的序列差异的影响，在对每种实蝇源序列来源地进行比较的基础上，尽量选取重复性比较高的登录序列作为源序列；31种实蝇中有些实蝇的3个源序列并不完整，但大部分序列都在源序列内；
桔小实蝇B.dorsalis，桔大实蝇B.minax，瓜实蝇B.cucurbitae，南亚果实蝇B.tau，普通果实蝇B.caudata，地中海实蝇C.capitata，油榄实蝇B.oleae和昆士兰实蝇B.tryoni的片段序列由本实验室按下面实验步骤扩增测序所得；
首先提取8种待检测实蝇的总DNA作为扩增模板；如前所述扩增样品所用引物有3对，第一对为UEA7和UEA10，第二对为SF和SR，第三对为DQF和DGR；
三对引物的扩增体系是一致的，均为：
TakaRa Taq 5 U/μL 1.0 μL
10×Buffer Mg2 Free 10.0 μL
MgCL2 25 mmol/L 10.0 μL
dNTP 10 mmol/L 1.6 μL
DNA 4.0 μL
20 μmol/L上游特异性引物TL 1.2 μL
20 μmol/L下游特异性引物TK 1.2 μL
补H2O至Total 100.0 μL
扩增条件分别为：
扩增片段F，引物对为UEA7和UEA10的扩增条件为：
1、94℃ 5min
2、95℃ 40s
3、48℃ 30s
4、72℃ 1min
5、72℃ 7min
条件2、3、430个循环
扩增片段S，引物对为SF和SR的扩增条件为：
1、94℃ 3min
2、94℃ 30s
3、49℃ 1min
4、72℃ 1min
5、72℃ 7min
条件2、3、436个循环
扩增片段DQ，引物对为DQF和DGR的扩增条件为：
1、94℃ 3min
2、94℃ 1min
3、45℃ 2min
4、72℃ 2min
条件2、3、45个循环
5、94℃ 30s
6、50℃ 2min
7、72℃ 2min
8、72℃ 7min
条件5、6、736个循环
本实验被检测的有8种实蝇除番石榴实蝇外的探针源序列为S外，其余7种实蝇桔小实蝇，桔大实蝇，瓜实蝇，南亚果实蝇，普通果实蝇，地中海实蝇和油榄实蝇，所以在扩增标记时只需采用前两对引物；
1.3源序列比对及探针初选
通过DNA Star软件包MegAlign程序中的Clustal W的方法对31种实蝇的源序列进行序列比对，初步筛选出31种实蝇内部的探针；初次特异性筛选的标准为尽量避免有超过8个以上的连续匹配碱基出现，最终总共筛选出了长度为40bp左右的探针80条，其中除了单带果实蝇，油榄实蝇，地中海实蝇纳塔尔实蝇的部分探针来自于源序列DQ，其它实蝇的所有探针均来自源序列F和S；
1.4初选探针质量评估
将所有80条初选探针输入软件Array designer 4.25，进行探针质量评估；Array designer 4.0是一款专门用于基因芯片探针设计的软件，它可以对探针质量进行理论评估；评估的内容包括：探针的长度，退火温度，GC含量，发卡结构，自身二聚体结构，连续序列长度和重复序列，然后对每条探针进行评分分级；探针等级由优、好、差、未搜索到几个等级表示，大于或等于75则为优，75～50之间为好，低于50的为差，若没有找到符合条件的探针或引物，则显示未搜索到；选取等级显示为好以上的探针，但是对于极个别的只有差探针存在的，则选取其为筛选后的探针；
1.5探针序列Blast比对
对经过探针质量评估的探针，逐条在NCBI网站上进行比对；比对时设定为检索除被检测种外其他实蝇物种的序列，目的除了再一次确认这些探针在31种实蝇内的特异性，更为重要的是确认这些探针对其他实蝇物种的特异性；
1.6最终探针序列的确定
经过以上步骤最终确定基因芯片探针40条；探针序列信息请见表1；
1.7质控探针序列
阳性质控探针和阴性质控探针各5条，分别用CP1-5和CN1-5表示；探针序列信息见表3；
2探针的制备
本实验所有探针均为人工合成的oligo DNA探针，探针合成由上海伯豪生物技术有限公司合成；
(3)基因芯片探针点样
本实验所用芯片采用合成后点样法，点制探针分子到芯片芯片上，具体步骤如下：
1探针与基片的结合
合成的oligo DNA探针分子上的负电基团可以与氨基基片上的活性氨基的正电基团产生静电结合反应，从而将探针分子牢固地固定在基片上；结合后采用紫外照射交联的方式来增强固定效果；
2点样液的制备
将合成的oligo DNA探针溶解于ddH2O中，配置成50mM的水溶液，之后与DMSO 1∶1混合，制备成25mM的50％DMSO溶液；
3点样过程
将预先设计并合成好的探针，在合适的点样条件下，通过接触式点样点载到玻片；按照芯片探针排布方式，将25mM的探针溶液转至384孔板中，在湿度60％，温度为25℃的条件下点样；点样结束后，将芯片置于紫外交联仪中，交联5分钟，取出，放入干燥箱中保存备用；
4探针布局
每张芯片点制5个block，每个block由12x6x3阵列组成；阵列内根据实验设计，含有阳性对照探针、阴性对照探针、目的探针、空白对照；芯片上探针排布方式图2和表3；
5芯片点制后的质量检测
芯片点制结束后，随机抽取部分芯片，用芯片扫描仪扫描芯片，检查是否有漏点的现象；芯片扫描图见图3，由图可以看出，本次点制的芯片无漏点现象，芯片上点的大小和分布比较均匀。
3. 根据权利要求1所述的一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片，其特征在于所述基片表面的表面还固定有阳性质控探针和阴性质控探针。
4. 根据权利要求2所述的一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片制备方法，其特征在于：
阳性质控探针共5个，分别为：
CP-1：GCCTCCACTTGTGATATGTAGCAGATCAATTAATACGATACCT
CP-2：GGTTCTGTTCTTCGTTACATAGTTAGTCTCCGACAGCTTCAAT
CP-3：CTGTGACAGACAACACGCAGTCTCTGTATTACTGATCACATAA
CP-4：CATGTATAGAACATAAGTGTCTCTAGATGAAGAGCAAGCGCAT
CP-5：TACAGACAGATGTATGTAACTTCATCTGGTCTGACTCCTTGTG
阴性质控探针共5个，分别为：
CN-1：ACACATGTGATATATCTGTGGCTTGAAGTCAGATCGTATGTGT
CN-2：AACGTCTGTGACACATCCTGTACAACTCATAATTATTGTGAGC
CN-3：CAGAGTATATATGACAGTGCAGAGCAGTCTGTCAGTCAGTGTG
CN-4：ATAATTCTGTGATGATGTTGAATACACGAGAGTTAGCTGATGC
CN-5：GCTGTAATCATTACGTGATAACGAACGTCAGAGAGATTGATGT。
5. 根据权利要求1所述的危险性实蝇类害虫基因检测芯片，其特征在于：玻璃基片的表面固定有1-5个探针阵列。
6. 根据权利要求4所述的一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片制备方法，其特征在于：所述阵列中按照下表探针排列方式的每条核苷酸探针重复3次，一个block的探针布局表(其中CP-1～CP-5：阳性对照探针；CN-1～CN-5：阴性对照探针；001～040：目的探针；B：空白对照即50％的DMSO)
”。
驳回决定认为：权利要求1要求保护一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片。对比文件1（CN 101045940 A，公开日期2007-10-03）公开了一种检疫性实蝇快速鉴定的基因芯片，其包括载体以及在载体上形成的三个或三个以上的鉴定探针，所述实蝇包含约30种“实蝇检疫黑名单”中的危害果蔬的实蝇（参见对比文件1的权利要求1）。权利要求1与对比文件1的区别在于：①实蝇种类不完全相同，针对每种实蝇的探针序列不同；②限定芯片采用Corning氨基化修饰的玻璃基片及其尺寸，其上固定的实蝇寡核苷酸探针为40bp。然而，对于区别技术特征①，权利要求1所述的具体实蝇种类均为常见危害性实蝇种类，且对比文件1已教导了扩增COI和COII基因并设计获得特异性探针的方法（参见对比文件1说明书下标第14页第2段），靶标与本申请相同，本领域技术人员容易想到以COI和COII基因为靶，通过计算机软件辅助筛选特征序列进而设计特异性鉴定探针；对于区别技术特征②，其已被对比文件2（CN 101481731 A，公开日期2009-07-15）公开（参见对比文件2说明书第12/13页第6段）。因此，权利要求1不具备创造性。权利要求2请求保护一种基因检测芯片的制备方法。对比文件1公开了制备实蝇类害虫基因检测芯片的方法，包括提供所需设备、筛选特异性探针、固定探针的步骤（参见对比文件1说明书下标第13-14页）。权利要求2与对比文件1的区别仅在于：①权利要求2限定了基因芯片基片的材料和尺寸特征；②限定探针的设计和制备步骤，以及探针序列；限定阳性和阴性质控探针；③限定点样探针至芯片上的具体步骤。其中区别技术特征①已被对比文件2公开（参见对比文件2说明书第12/13页第6段）；对于区别技术特征②，探针的筛选、设计以及具体序列是本领域技术人员根据对比文件1的教导利用常规技术手段即可获得的，而阳性和阴性质控探针是制备基因芯片常用的手段；对于区别技术特征③，具体合成和点样步骤也是本领域的常规技术手段。因此，权利要求2不具备创造性。从属权利要求3的附加技术特征已被对比文件1公开，从属权利要求4-6的附加技术特征均属于常规技术手段，因此权利要求3-6也不具备创造性。
申请人（下称复审请求人）对上述驳回决定不服,于2017年10月31日向国家知识产权局提出了复审请求，同时提交了权利要求书的修改替换页（共8页4项），其中将从属权利要求3和4的附加技术特征并入权利要求1中，将探针长度改为43bp，删除了权利要求中的括号并对权利要求的编号和引用关系进行了适应性修改。复审请求时经修改的权利要求1如下：
“1. 一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片，其特征在于，该检测检疫性实蝇的基因芯片采用Corning氨基化修饰基片，此基片为玻璃基片，表面已修饰有氨基活性基团；其上固定有用于检测危险性实蝇的寡核苷酸探针，43bp，所述寡核苷酸探针可分别与待测样品进行杂交反应；基片尺寸为25mm×75mm；所述寡核苷酸探针组含选自下述中的至少一种寡核苷酸探针序列：
印加按实蝇 GGCAGTATTCGCAATTATAGCTGGATTCATCCACTGATACCCT
墨西哥按实蝇 ACACATATAATATACACATAATGACAACATGAGCAGCCCTCGG
墨西哥按实蝇 AGCAGTATTCGCAATTATAGCTGGATTTATCCACTGATACCCT
暗色实蝇 ACAGTTGGAGGATTAACCGGAGTAATACTTGCTAATTCTTCTG
暗色实蝇 GCTACACTTCATGGAACCCAATTAAATTACTCCCCAGCAATAC
暗色实蝇 TCTTACATGACACTTACTATGTTGTAGCCCACTTCCATTATGT
中美按实蝇 TTCCCAACGACAGGTTATTTACCCTATACAGCTAAGTTCATCA
蜜柑大实蝇 GAGAGAATAGTAACCCAACGACAAACAGTCTACCCCACACAAT
桃实蝇 GGGCAGTATTCGCTATTATAGCAGGGTTCGTTCACTGATACCC
蒲桃实蝇 GACGTTGATACTCGTGCTTACTTCACCTCAGCCACAATAATTA
艳实蝇 GTTGGAGGACTGACGGGAGTCGTCCTTGCTAATTCATCTGTAG
普通果实蝇 CGACGATATTCTGATTACCCCGACGCTTATACAACATGAAACG
番石榴实蝇 ACACGGACAAACTATTGAAATAATCTGAACAATTCTCCCAGCA
黄瓜果实蝇 ATCTGAGAAAGATTAGTTACTCAACGCCAAGTAATCTATCCAA
瓜实蝇 GTTGTGTAAGCATCTGGGTAGTCGGAGTAACGTCGAGGTATTC
大洋洲实蝇 CTAGCCACATTACACGGTACTCAACTAAACTATTCTCCAGCCA
日本南瓜实蝇 TGGGCAACCACATAGTAAGTATCATGAAGGATAATGTCAACGG
日本南瓜实蝇 CGTAGTGGAAGTGGGCAACCACATAGTAAGTATCATGAAGGAT
平展实蝇 ATCTTAGTGACAGCCGCAGATGTAATTCATTCTTGAACAGTCC
单带果实蝇 GTAGGAATAGATGTGGATACTCGTGCTTATTTCACCTCAGCCA
扎维斯实蝇 GAATGCCTCGGCGATACTCCGACTATCCGGACGCATATACAAC
扎维斯实蝇 TAGCTGGATTTGTTCACTGATACCCTTTATTCACAGGACTGGT
辣椒实蝇 ATCGTGGAGGATAATATCTACAGACGAGTTAGCGAGAACAACC
油榄实蝇 ACACTGATACCCCCTATTCACCGGACTAAATCTAAACCCTAAT
黑肩角桔实蝇 TCTTAATAAATCGCCCTGGGTTATTTTACGGACAATGTTCAGA
南亚果实蝇 TATTATGAGCTTTAGGATTTGTGTTTTTATTCACAGTTGGAGG
昆士兰实蝇 TAATACTAATCCTGTAAAAAGTGGGTACCAGTGAACAAACCCT
三带实蝇 GTTTGTCCATTGATACCCCCTATTTACAGGGTTGTCGCTAAAC
三带实蝇 GTTGTGTAAGCATCTGGGTAATCTGAGTACCGTCGTGGTATCC
黑羽小条实蝇 GCTGCCGATGTAATTCATTCTTGAACAATTCCTGCTTTAGGAG
地中海实蝇 AGACGTTGACACACGAGCTTACTTTACATCAGCAACTATAATT
非洲芒果实蝇 TAGTAACAGCAGCCGACGTAATTCATTCTTGAACAATTCCTGC
非洲芒果实蝇 ACCTGGTTTATTTTATGGTCAATGTTCAGAAATCTGCGGAGCT
纳塔尔实蝇 ATTCCGAATCCAGGTAGAATAAAATATATACTTCGGGGTGACC
樱桃绕实蝇 GCATCTGGATAATCTGAGTATCGACGAGGTATTCCTGATAGGC
苹果绕实蝇 AGCTAAAACAACTCCTGTTAAACCTCCTACTGTAAATAGAAAA
桔小实蝇 TCATTTGAGAAAGTTTAGTCACGCAGCGACAAGTAATCTACCG
桔大实蝇 TGGCAGGATTCGTACATTGATATCCATTATTCACAGGACTCGC
桔大实蝇 TTCGTACATTGATATCCATTATTCACAGGACTCGCCCTAACCC
桔大实蝇 ACACAACGACAAACAATCTACCCTACGCAACTAAGTTCTTCAA
所述危险性实蝇为：印加按实蝇Anastrepha distincta、墨西哥按实蝇A.ludens、暗色实蝇A.serpentina、中美按实蝇A.striata、南亚果实蝇Bactrocera tau、瓜实蝇B.cucurbitae、桃实蝇B.zonata、蒲桃实蝇B.albistrigata、艳实蝇B.calophylli、桔小实蝇B.dorsalis、普通果实蝇B.caudata、番石榴实蝇B.correcta、油橄榄实蝇B.oleae、黄瓜果实蝇B.cucumis、大洋洲实蝇B.curvipennis、日本南瓜实蝇B.depressa、平展实蝇B.expandens、单带果实蝇B.frauenfeldi、扎维斯实蝇B.jarvisi、辣椒实蝇B.latifrons、黑肩角桔实蝇B.psidii、昆士兰实蝇B.tryoni、三带实蝇B.umbrosa、蜜柑大实蝇B.tsuneonis、桔大实蝇B.minax、地中海实蝇Ceratitis capitata、非洲芒果实蝇C.cosyra、黑羽小条实蝇C.anonae、纳塔尔实蝇C.Rosa、苹果绕实蝇Rhagoletis pomonella、樱桃绕实蝇
所述基片表面的还固定有阳性质控探针和阴性质控探针；
阳性质控探针共5个，分别为：
CP-1：GCCTCCACTTGTGATATGTAGCAGATCAATTAATACGATACCT
CP-2：GGTTCTGTTCTTCGTTACATAGTTAGTCTCCGACAGCTTCAAT
CP-3：CTGTGACAGACAACACGCAGTCTCTGTATTACTGATCACATAA
CP-4：CATGTATAGAACATAAGTGTCTCTAGATGAAGAGCAAGCGCAT
CP-5：TACAGACAGATGTATGTAACTTCATCTGGTCTGACTCCTTGTG
阴性质控探针共5个，分别为：
CN-1：ACACATGTGATATATCTGTGGCTTGAAGTCAGATCGTATGTGT
CN-2：AACGTCTGTGACACATCCTGTACAACTCATAATTATTGTGAGC
CN-3：CAGAGTATATATGACAGTGCAGAGCAGTCTGTCAGTCAGTGTG
CN-4：ATAATTCTGTGATGATGTTGAATACACGAGAGTTAGCTGATGC
CN-5：GCTGTAATCATTACGTGATAACGAACGTCAGAGAGATTGATGT。”
复审请求人认为：（1）本申请的探针相对于对比文件1能够检测更多种类的实蝇，且本申请的探针杂交效果良好，特异性显著，而对比文件1没有提供证明其探针特异性的实验数据；（2）本申请阳性质控探针和阴性质控探针效果良好，对于本领域技术人员而言是非显而易见的；（3）对于权利要求3，本申请的探针设计步骤较对比文件1更简单，且引物、体系、程序、步骤、点样时的各种参数均未被现有技术公开，因而是非显而易见的。
经形式审查合格，国家知识产权局于2017年11月27日依法受理了该复审请求，并将其转送至原审查部门进行前置审查。
原审查部门在前置审查意见书中认为：（1）尽管对比文件1并未公开与权利要求1相同的实蝇种类，所述增加的实蝇属于口岸检疫中常规的实蝇种类，在对比文件1提出了检测危险性实蝇的技术问题并提供了通过固定特异性探针的芯片以检测的技术方案的前提下，本领域技术人员可结合常规技术进行实施；（2）关于探针长度，公知常识性证据（《分子生物学》南京：南京师范大学出版社，2007年7月，第312页）记载，基因芯片的探针长度可以为45-70bp；或15-20bp，长探针和短探针同样有效。因此，本申请在对比文件1基础上延长探针序列长度属于常规且效果可预期的；（3）设计阳性、阴性质控探针的原则、方法、验证手段均属常规，效果可以合理预期，不具有预料不到的技术效果；（4）关于探针设计、制备步骤，对比文件1与本申请的区别仅在于特异性序列是否要求含有SNP位点，靶序列选择的原则和比对方法属于本领域的常规手段，且本申请的靶序列和探针序列未产生预料不到的技术效果；（5）关于点样探针至芯片上的步骤所涉及的具体浓度、温度、温度、交联时间等参数，本申请仅仅是提供了一套参数，并未显示所述步骤与特定探针序列之间的专用性，也未体现该参数组合产生了任何预料不到的技术效果，因而坚持原驳回决定。
随后，国家知识产权局成立合议组对本案进行审理，并于2019年02月11日向复审请求人发出复审通知书，指出：权利要求1-4不具备创造性。理由如下：对比文件1公开了一种检疫性实蝇快速鉴定系统及其采用的基因探针和基因芯片，该基因芯片包括载体以及在载体上形成的至少一个鉴定探针（参见对比文件1说明书第4页第3行至第6页第15行）；还公开了用于鉴定23种实蝇的55条鉴定探针的序列（参见对比文件1说明书第10页表1），其中17种实蝇与权利要求1中的实蝇种类相同。由于权利要求1限定了寡核苷酸探针组选自所述寡核苷酸探针序列的至少一种，这意味着权利要求1中包含多个并列技术方案。其中，对于包含针对上述17种实蝇的一条寡核苷酸探针或者多条寡核苷酸探针序列任意组合的技术方案，其与对比文件1的区别技术特征在于：（1）探针为43bp，探针序列不同；（2）限定了芯片采用Corning氨基化修饰基片，此基片为玻璃基片，基片尺寸为25mm×75mm；（3）限定了阳性质控探针和阴性质控探针序列。对于区别技术特征（1），对比文件1教导了设计探针的方法（参见对比文件1说明书第9页第6-21行），而对比文件1的三对扩增引物与本申请使用的3对引物所针对的目标片段是相似的，即探针设计所基于的源序列是相似的，因此本领域技术人员基于相似的源序列片段，能够容易地利用计算机辅助设计出特异于每种实蝇的探针序列；区别技术特征（2）已被对比文件2公开；对于区别技术特征（3），对比文件1公开了基因芯片表面固定有实验阳性对照探针和实验阴性对照探针（参见对比文件1说明书第8页第29-31行），其设计也属于本领域常规技术手段，且本申请说明书中并未阐述其阳性/阴性质控探针是如何设计的，其与实蝇种类的对应关系如何，也未提供证据表明所述阳性/阴性质控探针相对于其他质控探针取得了何种预料不到的技术效果。对于权利要求1的其余技术方案，其与对比文件1的区别技术特征除了上述（2）和（3）之外，还在于实蝇种类不同或者不完全相同，探针序列不同。然而由于未被对比文件1公开的14种实蝇类型均为已知的实蝇类害虫，本领域技术人员能够容易地基于源序列设计出每种实蝇的特异性探针并针对待测对象的不同设计包含这些不同实蝇的特异性探针的组合。因此，权利要求1不具备创造性。从属权利要求2进一步限定的探针阵列是本领域技术人员常规调整即可得到的，因此权利要求2也不具备创造性。权利要求3请求保护一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片制备方法。对比文件1公开了制备实蝇类害虫基因芯片的方法（参见对比文件1说明书第8页第27行至第9页第29行）。二者的区别技术特征在于：（1）限定了芯片采用Corning氨基化修饰基片，此基片为玻璃基片，基片尺寸为25mm×75mm；（2）所针对实蝇种类不同，设计探针时所使用的扩增源序列的引物和扩增条件、探针的具体筛选方法以及探针序列包括阳性质控探针和阴性质控探针的序列不同；（3）限定了探针的制备步骤。其中，区别技术特征（1）已被对比文件2公开；对于区别技术特征（2），如前所述，对比文件1公开的基因芯片所针对的实蝇种类有17种与本申请相同，而其余14种也是常见的实蝇类害虫类型，本领域技术人员有能力获得实蝇序列信息，通过序列比对获得特异性片段并设计出适宜的引物、扩增体系和反应条件，且在对比文件1包含实验阳性对照探针和实验阴性对照探针的教导下，其设计也属于本领域常规技术手段；对于区别技术特征（3），对比文件2公开了采用Omnigrid接触式芯片点样仪进行点样和质量检测的步骤（参见对比文件2说明书第10页第[0089]-[0094]段），且芯片点样为本领域常规技术手段，本领域技术人员能够通过简单调整确定适宜的点样液、点样条件和探针布局，说明书中也并未提供任何证据表明采用权利要求3所述的点样液、点样条件和探针阵列排列方式带来了何种预料不到的技术效果。因此权利要求3不具备创造性。从属权利要求4进一步限定的探针阵列排列方式属于本领域常规选择，且未带来预料不到的技术效果，因此也不具备创造性。
复审请求人于2019年03月08日提交了意见陈述书，未对权利要求书进行修改。复审请求人认为：（1）探针的设计无一定的规律可循，具有不可预测性，而本申请的探针序列经过了质量评估和Blast比对，是通过创造性劳动才筛选确定的具有特异性的探针；（2）对比文件没有公开质控探针的设计原则和获得方法，而获得本申请的质控探针的序列需要付出创造性劳动；（3）对比文件没有公开探针点样操作的具体步骤和注意事项，本申请的具体的探针点样流程需要付出创造性劳动。
在上述程序的基础上，合议组认为本案事实已经清楚，可以作出审查决定。
二、决定的理由
1. 审查文本的认定
复审请求人在答复复审通知书时未修改申请文件。因此，本复审决定依据的审查文本与复审通知书所针对的审查文本相同，即：申请日2014年7月24日提交的说明书第1-153段、说明书附图图1-图8、说明书摘要、摘要附图、说明书核苷酸和氨基酸序列表；以及2017年10月31日提出复审请求时提交的权利要求第1-4项。
2. 关于专利法第22条第3歀
专利法第22条第3款规定：创造性，是指与现有技术相比，该发明具有突出的实质性特点和显著的进步。
如果发明与最接近现有技术的区别技术特征为另一份对比文件中披露的相关技术手段，或者为公知常识，例如教科书或者工具书等中披露的解决该技术问题的技术手段，则认为现有技术中已经给出将该区别技术特征应用到该最接近现有技术以解决其存在的技术问题（即发明实际解决的技术问题）的启示，发明是显而易见的，不具有突出的实质性特点，不具备创造性。
具体在本案中，权利要求1请求保护一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片。对比文件1（CN 101045940 A，公开日期2007年10月03日）是最接近的现有技术，其公开了一种检疫性实蝇快速鉴定系统及其采用的基因探针和基因芯片，该基因芯片包括载体以及在载体上形成的至少一个鉴定探针，其中所述鉴定探针对应于每种实蝇的特异性DNA片段，所述特异性DNA片段是每种实蝇独有而其它种实蝇没有的且能够从所有种的实蝇中将每种实蝇区别出来而不会产生混淆的DNA序列片段（参见对比文件1说明书第4页第3行至第6页第15行）。对比文件1还公开了55条鉴定探针的序列，其用于鉴定23种实蝇（参见对比文件1说明书第10页表1）。其中，瓜实蝇、浦桃实蝇（蒲桃实蝇）、艳实蝇、桔小实蝇、番石榴实蝇、油榄实蝇（油橄榄实蝇）、黄瓜实蝇、大洋洲实蝇、日本南瓜实蝇、平展实蝇、扎维斯实蝇、辣椒实蝇、蜜柑大实蝇、地中海实蝇、纳塔尔实蝇、非洲芒果实蝇、苹果实蝇这17种实蝇与权利要求1中的实蝇种类相同。
由于权利要求1限定了寡核苷酸探针组选自所述寡核苷酸探针序列的至少一种，这意味着权利要求1中包含多个并列技术方案。其中，对于包含针对上述17种实蝇的一条寡核苷酸探针或者多条寡核苷酸探针序列任意组合的技术方案，其与对比文件1的区别技术特征在于：（1）探针为43bp，探针序列不同；（2）限定了芯片采用Corning氨基化修饰基片，此基片为玻璃基片，基片尺寸为25mm×75mm；（3）限定了阳性质控探针和阴性质控探针序列。基于上述区别技术特征可知，本申请实际解决的技术问题是，提供一组利用不同的探针序列检测上述相同的17种危险性实蝇害虫的基因检测芯片。
对于区别技术特征（1），对比文件1教导了设计探针的方法如下：根据NCBI中实蝇科所有的核酸序列，或自己测序的实蝇核酸序列，使用三对通用引物DQ、Uea和COII来扩增COI和COII基因（线粒体细胞色素氧化酶I、II）；从数据库获取所有序列对应于三对通用引物的PCR产物序列，得到三个序列集合，三者相互独立；针对每一个序列集合，按种分组并根据计算机联配结果得到一条能代表组内全部信息的特征序列；判断每一条特征序列的特征SNP位点，这些位点既能代表此种的共性，又能区别于其他种；根据特征位点设计探针，筛选出符合芯片实验要求的特异性探针（参见对比文件1说明书第9页第6-21行）。对于扩增引物，对比文件1的通用引物DQ、Uea分别对应于本申请的引物对DQF和DGR、UEA7和UEA10，而经BLAST对比，本申请引物对SF和SR与对比文件1的通用引物COII一样是用于扩增COII基因的，也就是说，对比文件1的三对扩增引物与本申请使用的3对引物所针对的目标片段是相似的，即探针设计所基于的源序列是相似的。由于探针的设计属于本领域常规技术手段（例如参见马文丽等主编，《DNA芯片技术的方法与应用》，广东科技出版社，2002年08月第1版，第21页记载了寡核苷酸探针的设计原则），且本领域技术人员普遍知晓如何通过序列比对获得特异性片段以用于设计探针（例如参见M.谢纳著，《生物芯片分析》，2004年10月第1版，图6.8公开了设计寡聚核苷酸生物芯片的方法，包括用计算机选择序列，利用计算程序如BLAST和全基因组序列比较来确定靶标序列的唯一性，只有那些非常特异性的序列才被点样在微阵列上以用于全基因组分析），因此本领域技术人员基于相似的源序列片段，能够容易地利用计算机辅助设计出特异于每种实蝇的探针序列。
对于区别技术特征（2），对比文件2（CN 101481731 A，公开日期2009年07月15日）公开了一种基因芯片，所述芯片的microarray载体为氨基修饰的玻璃片基，尺寸为25mm×75mm，购自美国Corning公司（参见对比文件2说明书第[0091]段），即区别技术特征（2）已被对比文件2公开。
对于区别技术特征（3），对比文件1公开了基因芯片表面固定有实验阳性对照探针和实验阴性对照探针（参见对比文件1说明书第8页第29-31行）。而且阳性质控探针和阴性质控探针的设计也属于本领域常规技术手段（例如参见马文丽等主编，《DNA芯片技术的方法与应用》，广东科技出版社，2002年08月第1版，第22页公开了对照组探针的设计原则，其包含阳性对照和阴性对照，其中设立阳性对照的目的是让不同样品中的阳性对照相关基因能够杂交，以作为内对照进行校正，而阴性对照的选择应避免与目的基因有同源性，从而不致于产生杂交信号）。且本申请说明书中并未阐述其阳性/阴性质控探针是如何设计的，其与实蝇种类的对应关系如何，也未提供证据表明所述阳性/阴性质控探针相对于其他质控探针取得了何种预料不到的技术效果。
对于权利要求1的其余技术方案，即寡核苷酸探针组包含针对另外14种实蝇的一条寡核苷酸探针或者多条寡核苷酸探针序列任意组合的技术方案，其与对比文件1的区别技术特征在于：（1）实蝇种类不同或者不完全相同，探针序列不同；（2）限定了芯片采用Corning氨基化修饰基片，此基片为玻璃基片，基片尺寸为25mm×75mm；（3）限定了阳性质控探针和阴性质控探针序列。基于上述区别技术特征可知，本申请实际解决的技术问题是，提供一组检测不同种类的危险性实蝇害虫的基因检测芯片。
对于区别技术特征（1），由于未被对比文件1公开的14种实蝇类型均为已知的实蝇类害虫（参见吴佳教等主编，《实蝇类重要害虫鉴定图册》，广东科技出版社，2009年9月第1版，第22页音加实蝇（即印加按实蝇）、第30页墨西哥实蝇（即墨西哥按实蝇）、第44页暗色实蝇、第48页条纹按实蝇（即中美按实蝇）、第104页南瓜实蝇（即南亚果实蝇）、第113页桃实蝇、第66页黑纹实蝇（即普通果实蝇）、第79页单带实蝇（即单带果实蝇）、第102页新喀里多尼亚实蝇（即黑肩角桔实蝇）、第107页昆士兰实蝇、第111页三带实蝇、第91页橘大实蝇（即桔大实蝇）、第124页番荔枝实蝇（即黑羽小条实蝇）、第170页欧洲樱桃实蝇（即樱桃绕实蝇），以上名称均以拉丁文为准），且基于前述同样的理由，本领域技术人员能够容易地基于源序列设计出每种实蝇的特异性探针，因此针对待测对象的不同设计包含这些不同实蝇的特异性探针的组合对于本领域技术人员来说也是容易做到的。
对于区别技术特征（2）和（3），参见前述相关评述。
综上所述，在对比文件1的基础上结合对比文件2以及本领域常规技术手段从而得到权利要求1请求保护的技术方案，对于本领域技术人员来说是显而易见的。权利要求1不具有突出的实质性特点和显著的进步，不具备专利法第22条第3款规定的创造性。
从属权利要求2进一步限定了玻璃基片表面固定有1-5个探针阵列。对比文件2公开了基因芯片设置有3个杂交矩阵，本领域技术人员有能力调整芯片上排列阵列的方式，不需要付出创造性劳动。因此，当其引用的权利要求1不具备创造性时，权利要求2也不具备创造性。
权利要求3请求保护一种危险性实蝇类害虫基因检测芯片制备方法。对比文件1为最接近的现有技术，其公开了制备实蝇类害虫基因芯片的方法，所述基因芯片包括对照探针和鉴定探针，所述鉴定探针为实蝇的特异DNA序列片段，可以与对应的目标实蝇发生碱基配对反应，是该种实蝇独有而其它种实蝇没有的且能够从所有种的实蝇中将该种实蝇区别出来而不会产生混淆的DNA序列片段，其制备包括如下步骤：根据NCBI中实蝇科所有的核酸序列，或自己测序的实蝇核酸序列，使用三对通用引物DQ、Uea和COII来扩增COI和COII基因（线粒体细胞色素氧化酶I、II）片段；从数据库获取所有序列对应于三对通用引物的PCR产物序列，得到三个序列集合，三者相互独立；针对每一个序列集合，按种分组并根据计算机联配结果得到一条能代表组内全部信息的特征序列；判断每一条特征序列的特征SNP位点，这些位点既能代表此种的共性，又能区别于其他种；根据特征位点设计探针，筛选出符合芯片实验要求的特异性探针；采用特异性检验算法，全面评估所有探针，分三级给出最终探针，并对探针做修饰以调整Tm值等；采用原位合成法或者合成点样法将这些特异性DNA序列片段固定在载体上以形成探针（参见对比文件1说明书第8页第27行至第9页第29行）。
权利要求3的制备方法与对比文件1所述制备方法的区别技术特征在于：（1）限定了芯片采用Corning氨基化修饰基片，此基片为玻璃基片，基片尺寸为25mm×75mm；（2）所针对实蝇种类不同，设计探针时所使用的扩增源序列的引物和扩增条件、探针的具体筛选方法以及探针序列包括阳性质控探针和阴性质控探针的序列不同；（3）限定了探针的制备步骤。基于上述区别技术特征可知，本申请实际解决的技术问题是通过特定的探针设计和制备方法制备用于检测所述31种实蝇的基因检测芯片。
对于区别技术特征（1），如前所述，其已被对比文件2公开。
对于区别技术特征（2），如前所述，对比文件1公开的基因芯片所针对的实蝇种类有17种与本申请相同，而其余14种也是常见的实蝇类害虫类型，实验对象的选择属于本领域常规技术手段，且本领域技术人员有能力通过测序获得实蝇序列信息，或者在数据库中寻找；对比文件1教导了扩增与本申请相似的源序列以用于筛选探针，本领域技术人员根据引物设计的基本原则可以容易地设计出适宜的引物，并且扩增体系和反应条件也是在合理范围内调整即可获得的，无需付出创造性劳动；如前所述，对比文件1教导了通过筛选特异性DNA片段以设计探针，而探针的设计属于本领域常规技术手段，本领域技术人员也普遍知晓如何通过序列比对获得特异性片段以用于设计探针，且探针质量评估、比对等过程均由软件包或者程序完成，这些是序列分析时普遍使用的工具，本领域技术人员熟悉相关参数的设置及评估规则，因此本领域技术人员基于相似的源序列片段，能够容易地利用计算机手段辅助设计出特异于每种实蝇的探针序列；对于阳性/阴性质控探针，如前所述，对比文件1公开了基因芯片表面固定有实验阳性对照探针和实验阴性对照探针，而且阳性/阴性质控探针的设计也属于本领域常规技术手段，本领域技术人员根据常规设计原则即可容易地获得阳性/阴性质控探针。
对于区别技术特征（3），对比文件2公开了采用Omnigrid接触式芯片点样仪，按照特定的矩形分布进行点样，完毕后在紫外线交联仪中交联，并通过芯片扫描仪进行芯片质量检测以检查点样质量的步骤（参见对比文件2说明书第10页第[0089]-[0094]段），即“探针与基片的结合”、“芯片点制后的质量检测”步骤已被对比文件2公开。马文丽等主编，《DNA芯片技术的方法与应用》，广东科技出版社，2002年08月第1版，第48页也记载了“玻片经氨基化修饰后衍生的氨基在中性条件下带正电，可与打印的DNA探针上带负电的磷酸基以离子键结合。用紫外线（UV）照射处理后，DNA上胸腺嘧啶残基与烷基胺上的碳之间以自由基作用形成非特异性偶联。氨基化玻片通过这种紫外交联法以静电作用或非特异性共价结合的方式可使DNA探针稳定地固化在玻片表面。此外，上述公知常识性文献还在第21页记载了人工合成寡核苷酸探针的方法；第三章第二节“针式打印”部分（针式打印即接触式点样法）记载了针式打印的具体步骤，包括环境控制（第33页）、简单操作流程（第35页）、阵列的设计（第36页）等。也就是说，芯片点样为本领域常规技术手段，本领域技术人员普遍知晓点样过程的基本要求和具体步骤，能够通过简单调整确定适宜的点样液、点样条件和探针布局，无需付出创造性劳动。说明书中也并未提供任何证据表明采用权利要求3所述的点样液、点样条件和探针阵列排列方式带来了何种预料不到的技术效果。
综上所述，在对比文件1的基础上结合对比文件2以及本领域常规技术手段从而得到权利要求3请求保护的技术方案，对于本领域技术人员来说是显而易见的。权利要求3不具有突出的实质性特点和显著的进步，不具备专利法第22条第3款规定的创造性。
从属权利要求4进一步限定了芯片中的探针阵列排列方式。然而，探针阵列的排列方式是本领域技术人员根据探针数量、打印方式、玻片大小等因素自由设置的，属于本领域常规选择，且说明书中也未提供证据表明此种排列方式相比其他排列方式具有预料不到的技术效果。因此在其引用的权利要求3不具备创造性的情况下，权利要求4也不具备专利法第22条第3款规定的创造性。
复审请求人在意见陈述中指出：（1）探针的设计无一定的规律可循，具有不可预测性，而本申请的探针序列经过了质量评估和Blast比对，是通过创造性劳动才筛选确定的具有特异性的探针；（2）对比文件没有公开质控探针的设计原则和获得方法，而获得本申请的质控探针的序列需要付出创造性劳动；（3）对比文件没有公开探针点样操作的具体步骤和注意事项，本申请的具体的探针点样流程需要付出创造性劳动。
对此，合议组认为：
（1）探针的设计属于本领域常规技术手段，例如参见马文丽等主编，《DNA芯片技术的方法与应用》，广东科技出版社，2002年08月第1版，第21页记载了寡核苷酸探针的设计原则及考虑因素，例如探针长度、特异性、丰度、碱基组成等，本领域技术人员根据这些设计原则，或者借助常规的引物探针设计软件，结合有限的试验验证即可筛选得到特异性探针。且对比文件1教导了获得特异性序列并针对特异性位点设计探针的方法，本领域技术人员普遍知晓如何通过序列比对获得特异性片段以用于设计探针，例如参见M.谢纳著，《生物芯片分析》，2004年10月第1版，图6.8公开了设计寡聚核苷酸生物芯片的方法，包括用计算机选择序列，利用计算程序如BLAST和全基因组序列比较来确定靶标序列的惟一性，只有那些非常特异性的序列才被点样在微阵列上以用于全基因组分析。因此在对比文件1和本申请探针设计基于的源序列片段相似的情况下，本领域技术人员能够容易地利用计算机辅助设计出特异于每种实蝇的探针序列，并不需要付出创造性劳动。对于复审请求人强调的效果，本申请说明书实施例中仅对4种实蝇种类进行了简单验证，并未针对31种实蝇进行全面检测，且其验证时所使用的实蝇样本是类型已知的，并未提供采用本申请的基因检测芯片对未知样本进行准确鉴定的实验数据，因此本领域技术人员无法确定所设计探针的特异性。也即说明书所提供的证据不足以证明本申请的探针具有所声称的特异性效果。（2）对于阳性质控探针和阴性质控探针，对比文件是否公开了效果数据与本申请探针的技术效果并无关系。说明书中也是仅仅公开了探针序列，并未阐述其是如何设计的，与31种实蝇的对应关系如何，实施例中也未提供证据表明所述阳性/阴性质控探针相对于其他质控探针取得了何种预料不到的技术效果。因此，在本领域技术人员普遍知晓对照探针的设计原则的情况下，获得阳性/阴性质控探针也无需付出创造性劳动。（3）对比文件1教导了寻找每种实蝇的特异性DNA片段从而设计探针的方法，其鉴定特异性DNA片段的步骤也是通过序列比对进行的，这些过程均由序列分析时普遍使用的计算机软件包或者程序完成，执行的难易程度并无差异。虽然本申请在引物、扩增条件、点样液、探针阵列布局、点样条件等方面与现有技术存在差异，然而这些均是本领域常规使用的技术或者常规选择，本领域技术人员基于引物设计或芯片点样的基本要求进行简单调整即可获得。且说明书中并未提供证据表明使用所述制备方法获得了何种预料不到的技术效果。因此，复审请求人的意见陈述不具有说服力。
基于以上事实和理由，本案合议组作出如下审查决定。
三、决定
维持国家知识产权局于2017年08月10日对本申请作出的驳回决定。
如对本复审请求审查决定不服，根据专利法第41条第2款的规定，复审请求人可以自收到本决定之日起三个月内向北京知识产权法院起诉。
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